儿茶素对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用及其机制研究

论文摘要

目的 筛选具有抗体外培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的儿茶素单体并观察其对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用,进而探讨其作用机制,为开发高效安全的抗心肌缺血再灌注损伤药物提供理论依据。 方法 体外纯化培养的大鼠乳鼠心肌细胞经缺氧3h再给氧1h,建立心肌细胞缺氧再给氧损伤模型;通过测定各儿茶素单体在该模型中保护作用的半数有效浓度(EC50),筛选出保护作用明显的GCG、EGCG和ECG三类单体,并观察这三类单体的抗体外培养心肌细胞缺氧再给氧损伤作用,主要观察指标:心肌细胞存活率、心肌细胞一般形态学变化,心肌细胞搏动频率变化,心肌细胞LDH、MDA释放量,心肌细胞培养基中SOD、GSH-Px活性及心肌细胞膜ATP酶活性;分别选用蛋白激酶C被阻断、Gi/o蛋白失活及正常的大鼠乳鼠心肌细胞建立缺氧再给氧损伤模型,观察并比较GCG、EGCG在这些不同细胞模型中保护作用的差异,分析心肌细胞酶谱的变化,探讨儿茶素抗体外培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的作用机制。 结果 GCG、EGCG和ECG能显著提高缺氧再给氧损伤心肌细胞的存活率和SOD、GSH-Px活性,减少LDH、MDA的释放,改善缺氧再给氧损伤心肌细胞形态学变化情况;在蛋白激酶C被阻断和Gi/o蛋白失活的体外培养心肌细胞缺氧再给氧损伤模型中,GCG、EGCG的保护作用较其在正常心肌细胞缺氧再给氧损伤模型中的保护作用要弱,但和模型组比较,仍具有明显的保护作用,即PKC阻断剂和Gi/o蛋白失活剂可明显降

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 一、前言
• 二、材料与方法
• （一） 材料
• 1. 动物
• 2. 仪器
• 3. 药品
• 4. 试剂
• （二） 方法
• 1. 大鼠乳鼠心肌细胞的原代培养及纯化
• 2. 儿茶素对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞最大无毒浓度的测定
• 50）的测定'>3. 儿茶素抗体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤半数有效浓度（EC₅0）的测定
• 4. GCG、EGCG、ECG对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤保护作用实验
• 5. 蛋白激酶 C（PKC）和 Gi/o蛋白介导对 GCG、EGCG保护体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的影响实验
• 6. GCG、EGCG对缺氧再给氧损伤大鼠乳鼠心肌细胞膜 ATP酶的影响实验
• 7. 统计学分析
• 三、结果
• （一） 儿茶素对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞的最大无毒浓度
• （二） 儿茶素抗体外培养大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤半数有效浓度
• （三） GCG、EGCG、ECG对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的影响
• （四） 蛋白激酶 C（PKC）和 Gi/o蛋白介导对 GCG、EGCG保护体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的影响
• （五） GCG、EGCG对缺氧再给氧损伤大鼠乳鼠心肌细胞膜内ATP酶的影响
• 四、分析与讨论
• （一） 纯化培养大鼠乳鼠心肌细胞方法学探讨
• （二） 缺血再灌注损伤细胞模型评价
• （三） 药效学评价指标探讨
• （四） 儿茶素保护体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的机制探讨
• 五、结论
• 六、参考文献
• 七、附图
• 致谢
• 附:文献综述