论文摘要
目的:（1）探讨成体大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）生物学特性;（2）体外诱导MSCs向神经元样细胞分化;（3）制作大鼠帕金森病（PD, Parkinson’s disease）模型;（4）移植MSCs治疗大鼠PD,探讨MSCs治疗PD大鼠的可行性及可能的机制。方法:（1）MSCs扩增纯化后,计数培养板中细胞数量,测定生长速度;应用流式细胞仪测定分化前后细胞周期;利用膜片钳技术,了解分化前后细胞的电生理性质。（2）用bFGF联合N2诱导MSCs分化为神经元样细胞,对分化后细胞行免疫细胞化学染色鉴定。（3）应用大鼠立体定向仪,向大鼠内侧前脑束微量注射6-OHDA,制作大鼠PD模型。（4）15只PD大鼠,随机分为2组,一组移植Brdu标记的MSCs到模型大鼠的纹状体内（n=11）,一组注射PBS（n=4）到相同靶点处。术后4个月中定期对大鼠进行旋转实验测试,并分别在术后2周和4月时进行脑内针道处免疫组化TH和Brdu检测。结果:（1）应用贴壁培养筛选法体外完全可以培养出大鼠骨髓MSCs,当MSCs接种浓度为2×103/ml时,在标准条件下,约6天可以增殖4倍。在MSCs无血清DMEM/F12培养液中加入bFGF和N2,可以诱导MSCs分化为神经元样细胞,72小时分化率达95.6%,免疫细胞化学染色显示神绎元样细胞NESTIN、NSE、NF阳性表达,流式细胞仪测定分化后细胞G0/G1期97.5%,而分化前细胞S+G2/M期23.7%。但分化前后细胞电生理检测中没有检测到明显的动作电位。（2）注射6-OHDA 12μg到大鼠内侧前脑束,通过大鼠的旋转实验测试,有16只大鼠制模成功,成功率为23.8%,成功大鼠模型的毁损侧黑质处TH阳性神经元仅占正常侧毁损侧3.8%。（3）Brdu标记的MSCs移植到模型大鼠的纹状体内,术后2周及4月时移植针道处及针道周围可见外源性Brdu阳性MSCs,并有外源性细胞表达TH。细胞移植组的PD大鼠症状较PBS注射组行为学也明显改善。结论:（1）骨髓MSCs取材容易,易于体外培养,并可以向神经元样细胞分化。（2）通过注射6-OHDA到大鼠脑内,可以成功制作出PD模型。（3）移植成体骨髓MSCs到大鼠PD模型的纹状体内可以改善PD模型大鼠的症状,且表达TH蛋白。
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