菌草灵芝多糖的分离纯化及其与茶多酚抗氧化协同作用研究

论文摘要

灵芝（Ganoderma luciderm）属于多孔菌科,是著名的药用真菌,在我国已有两千多年的药用史。采用菌草技术栽培的菌草灵芝不仅具有其他灵芝的药用特性,而且与普通椴木灵芝和野生灵芝相比,其有效成分含量更高。灵芝多糖是其最主要的功能成分之一,研究表明,其具有抗肿瘤、免疫调节、清除氧自由基、降血糖、降血脂及护肝等功效。本课题以菌草灵芝为原材料,主要从灵芝子实体中提取纯化灵芝多糖,结合高分子物理和生物试验的方法研究菌草灵芝多糖的化学结构及其与茶多酚复合的抗氧化活性。1.从菌草灵芝子实体中,采用热水浸提法获得水溶性粗多糖,以总糖含量为测定指标,通过单因素试验及正交试验优化灵芝水溶性多糖的提取工艺,最佳提取条件为：提取时间3 h,温度100℃,料液比1：25,此时多糖得率最高,为2.38%。2.采用Sevag法和聚酰胺法除蛋白,通过对蛋白去除率和多糖损失率的比较分析,聚酰胺法更优。灵芝子实体除蛋白多糖经AB-8树脂除色素并透析去小分子,再经DEAE Sephadex A-25层析可获得四种灵芝多糖组分,分别命名为GLPS-1、GLPS-2、GLPS-3和GLPS-4。3.通过Sephadex G-200测定GLPS-1、GLPS-2、GLPS-3和GLPS-4组分的均一性分布,结果表明GLPS-1、GLPS-2和GLPS-3具有均一的分布特性,而GLPS-4多糖组分较为复杂。4.通过红外光谱及1HNMR谱图分析,GLPS-1、GLPS-2和GLPS-3三种菌草灵芝多糖组分具有典型的糖类物质的特征吸收峰,GLPS-1、GLPS-2和GLPS-3的糖残基为吡喃环型,糖苷键的连接方式可能为β型。5.菌草灵芝多糖各组分对羟基自由基、DPPH自由基均有较好的清除作用,还原力也比较强。其中,粗多糖的抗氧化能力明显强于纯化多糖；在菌草灵芝粗多糖与茶多酚的复合抗氧化作用中,复合物在抗氧化能力（对羟基自由基、DPPH自由基的清除作用和总还原力）上则均表现出显著的协同作用,其中复合物对羟基自由基的清除作用的协同效果最为显著,最高可提高15倍。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 菌草灵芝
• 2 灵芝的生物学特性及其研究进展
• 2.1 灵芝的主要活性物质
• 2.1.1 灵芝多糖
• 2.1.2 三萜类化合物
• 2.1.3 核苷类
• 2.1.4 氨基酸多肽类
• 2.1.5 甾醇类
• 2.1.6 其他有效化学成分
• 2.2 灵芝多糖的主要药理作用
• 2.2.1 抗肿瘤作用
• 2.2.2 免疫调节作用
• 2.2.3 抗氧化作用
• 2.2.4 降血糖作用
• 2.2.5 其他生理作用
• 2.3 灵芝多糖的分离纯化及结构鉴定
• 2.3.1 灵芝多糖的提取方法
• 2.3.2 灵芝多糖的分离
• 2.3.3 灵芝多糖的分级纯化
• 2.3.4 灵芝多糖的结构
• 3 本研究的目的、意义和内容
• 3.1 本研究的目的和意义
• 3.2 研究内容
• 第二章 菌草灵芝多糖的提取条件优化
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 仪器及试剂
• 2.2.1 化学试剂
• 2.2.2 主要仪器与设备
• 3 实验方法
• 3.1 灵芝多糖的提取流程
• 3.2 葡萄糖标准曲线
• 3.3 灵芝多糖含量的测定
• 3.4 单因素试验
• 3.5 交试验
• 4 结果与分析
• 4.1 葡萄糖标准曲线
• 4.2 单因素试验结果
• 4.2.1 料液比对菌草灵芝多糖提取率的影响
• 4.2.2 提取温度对菌草灵芝多糖提取率的影响
• 4.2.3 提取时间对菌草灵芝多糖提取率的影响
• 4.3 正交试验结果
• 5 本章小结
• 第三章 菌草灵芝多糖的分离纯化
• 1 引言
• 2 材料与仪器
• 2.1 实验材料
• 2.2 化学试剂
• 2.3 主要仪器与设备
• 3 实验方法
• 3.1 水提菌草灵芝多糖纯化工艺流程
• 3.2 灵芝多糖的脱蛋白
• 3.2.1 Sevag法脱蛋白
• 3.2.2 聚酰胺法脱蛋白
• 3.2.3 检测方法
• 3.3 灵芝多糖的脱色
• 3.4 灵芝多糖的透析
• 3.5 灵芝多糖DEAE SephadexA-25葡聚糖凝胶层析柱色谱分级
• 3.6 灵芝多糖纯度鉴定
• 4 结果与分析
• 4.1 蛋白质浓度标准曲线
• 4.2 Sevag法脱蛋白与聚酰胺法脱蛋白结果比较
• 4.2.1 Sevag法脱蛋白
• 4.2.2 聚酰胺法脱蛋白
• 4.3 柱层析纯化结果
• 4.3.1 DEAE Sephadex A-25层析结果
• 4.3.2 Sephadex G-200纯化结果
• 5 本章小结
• 第四章 菌草灵芝多糖的结构
• 1 引言
• 2 材料与仪器
• 2.1 实验材料
• 2.2 化学试剂
• 2.3 主要仪器与设备
• 3 实验方法
• 3.1 红外光谱分析
• 1H NMR分析'>3.2¹H NMR分析
• 4 结果与分析
• 5 本章小结
• 第五章 菌草灵芝多糖及其与茶多酚复合的相互抗氧化作用
• 1 引言
• 2 材料与仪器
• 2.1 实验材料
• 2.2 化学试剂
• 2.3 主要仪器与设备
• 3 实验方法
• 3.1 羟自由基清除能力的测定
• 3.2 DPPH自由基清除能力的测定
• 3.3 总还原力测定
• 4 结果与分析
• 4.1 菌草灵芝多糖的抗氧化作用
• 4.1.1 菌草灵芝多糖对羟基自由基的清除作用
• 4.1.2 菌草灵芝多糖对DPPH自由基的清除作用
• 4.1.3 菌草灵芝多糖的还原力
• 4.2 菌草灵芝粗多糖与茶多酚的相互抗氧化作用
• 4.2.1 对羟基自由基的清除作用的相互作用
• 4.2.2 对DPPH自由基的清除作用的相互作用
• 4.2.3 菌草灵芝粗多糖与茶多酚的还原力
• 5 本章小结
• 第六章 总结和展望
• 参考文献
• 缩略语一览表
• 致谢