论文摘要
草原龙胆(Eustoma grandiflorum)属龙胆科草本植物,是流行的鲜切花材料,具有一定的耐盐性,是一种具有重要经济价值的研究材料。为了研究草原龙胆的抗盐机理,分离抗盐相关基因,提高其抗盐水平,进行了以下三方面的研究:1草原龙胆盐抗性相关基因的筛选为了分离草原龙胆盐抗性相关基因,以NaCl 400 mmol/L处理的草原龙胆叶片为tester,清水处理的对照为driver,制作了盐胁迫抑制差减(SSH)文库。经过序列测定以及序列分析,获得了658条非重复序列。通过GO(Gene Ontology)的分子功能、生物学途径及细胞组件三方面的分析,获得了123条序列的注释,占总序列的19%。在生物学途径中分为:有丝分裂检查点、类泛素化蛋白修饰、氧化胁迫反应、转运、电子传递等14类;分子功能中分为过氧化氢酶活性、催化活性、环氧化物酶活性、单氧化酶活性、谷胱甘肽脱氢酶活性等21类;在细胞组件中分为线粒体、叶绿体、过氧化物酶体、乙醛酸循环体、细胞核等10类。2草原龙胆盐胁迫基因表达分析为了研究草原龙胆在盐胁迫条件下的基因表达谱,以构建的SSH文库制作了基因芯片。提取NaCl 600 mmol/L处理3 h草原龙胆的叶片以及清水处理的对照mRNA,经反转录后分别进行了Cy3和Cy5的标记,进行了芯片杂交。杂交数据利用limma软件包进行了数据标准化,分析获得了差异表达基因。结果显示,显著上调表达的基因为14条,显著下调的基因为16条。其中功能已知的序列为5条,分别为硫氧还蛋白、类泛素化蛋白、苏氨酸转运蛋白、脱氢抗坏血酸还原酶、细胞色素P450。3草原龙胆BADH基因的遗传转化为了提高草原龙胆的盐抗性,对草原龙胆进行了BADH基因的遗传转化。从拟南芥中克隆了BADH基因的编码区全长,经过测序验证正确后,将其构建到了植物表达载体pH2GW7,0上。表达载体转化农杆菌LBA4404后制备了农杆菌侵染菌株。通过农杆菌介导法转化草原龙胆,获得了1个转化株系。PCR和Southern杂交检测表明,目的基因已经整合到了草原龙胆基因组中。