论文摘要
前言近年的研究显示，肺动脉高压时肺组织的炎症反应是其中一个重要病理生理机制。核因子κB（NF-κB）是一种调控基因表达的DNA结合蛋白，其可通过调控细胞因子和粘附分子基因的表达，参与机体的各种炎症和免疫反应。多种因素如细胞因子、氧化剂、缺血等均是NF-κB活化的刺激信号，NF-κB活化后可促进黏附分子、即早基因、细胞表面受体和细胞因子的基因表达，进一步加重炎症反应。而且多种细胞因子可以引起肺血管收缩及内皮细胞增殖，促进肺动脉高压发生。ICAM-1为单链跨膜糖蛋白，ICAM-1在炎症反应过程中发挥重要作用。近来很多研究认为ICAM-1的表达可能与NF-κB的活化有关，NF-kappa B可能从基因转录水平上调控着ICAM-1的表达，从而影响着其后的一系列炎症发展过程，如粘附、迁移等。研究表明，5-HT转运体抑制剂氟西汀（fluoxetine）在离体时消除5-HT对培养的平滑肌细胞的增殖反应，且明显降低血清对肺动脉平滑肌细胞的增殖作用。在整体实验，氟西汀完全逆转MCT诱导的PAH，抑制PA-SMC增殖，抑制增加的炎性因子IL-1β、IL-6、MCP-1 m RNA。说明Flu对炎性肺动脉高压有一定保护和治疗作用。本实验采用野百合碱（monocrotaline，MCT）诱导的肺动脉高压大鼠模型，研究细胞黏附分子和NF-κB在肺炎症中的作用，探讨炎症反应的机制，寻找保护肺损伤的药物作用点；观察氟西汀对肺动脉高压大鼠肺炎症损伤后黏附分子和NF-κB表达的影响，从抗炎角度探讨氟西汀的保护作用。实验材料和方法健康雄性Wistar大鼠32只，随机分为对照组、MCT组、FLU高剂量治疗组及FLU低剂量治疗组。MCT组和FLU治疗组大鼠一次性腹腔注射MCT 60mg／kg，对照组大鼠腹腔注射同等剂量的溶剂。FLU低、高剂量治疗组分别给予2mg／kg和10mg／kg FLU灌胃治疗，对照组和MCT组给予相应的溶剂处理。常规饲养21天。21天后，用20％乌拉坦按5ml／kg腹腔麻醉大鼠，剥离右颈动脉，将充满肝素的（0.1％）PV-1聚乙烯导管（尖端弯曲）经右颈静脉插入右心室，经血液冲入肺动脉，并通过P23ID压力换能器连接多导生理记录仪（日本光电）测量并记录肺动脉压；应用PE-50导管测量颈动脉压（体循环压力）。然后开胸取新鲜肺组织，取出大鼠心脏，分离右心室（RV）、室中膈和左心室（LV+S），滤纸吸水后称重，计算右心室肥大指数：RV／LV+S。HE染色肺组织石蜡包埋，切片做HE染色，光学显微镜检测。测量肺肌型小动脉中膜厚度，对其进行统计学分析。Western blot取肺组织约100mg，剪碎，提取胞浆蛋白和胞核蛋白。Bradford法测蛋白浓度，按每个样品50ug上样进行SDS-PAGE蛋白电泳，一抗1：800，二抗1：3000稀释杂交。ECL显影。结果腹腔注射MCT 21天后，与对照组比较，MCT组大鼠肺动脉压力显著升高（MCT 25.6±4.4，vs control 15.7±1.9 P＜0.05），右心肥大指数（MCT 0.4±0.05，vs control 0.2±0.04 P＜0.05）明显增加，表明模型制造成功。用氟西汀处理过的大鼠肺动脉压力显著降低（FLU2 20.5±3.5：FLU10 19.4±3.4 P＜0.05 vs MCT），右心肥大指数降低（FLU2 0.3±0.05；FLU10 0.3±0.02 P＜0.05 vs MCT）。肺动脉高压大鼠肺血管平滑肌增厚（MCT 0.5±0.05 vs control 0.3±0.03 P＜0.05），FLU可使血管平滑肌细胞增殖减轻（FLU20.4±0.07：FLU10 0.4±0.02 P＜0.05 vs MCT）。western blot检测表明，与对照组比较，MCT组大鼠肺组织ICAM-1、NF-κB蛋白表达增加（P＜0.05），FLU可明显降低ICAM-1、NF-κB蛋白（P＜0.05）表达水平。结论大鼠注射MCT21天后，形成了肺动脉高压，粘附分子ICAM-1及转录因子NF-κB的表达上调，提示肺动脉高压时有炎症反应的参与。FLU降低肺动脉压和右心肥大指数，抑制ICAM-1、NF-κB蛋白表达，说明对MCT诱导的肺动脉高压的抑制作用与抗炎机制有关。