兔骨髓间充质干细胞移植心梗模型后植入细胞凋亡的研究

论文摘要

目的：体外诱导骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）向肌源性心肌细胞分化，探索MSCs在体外进行培养、分化。经5-氮胞苷诱导后，通过细胞标记及免疫组化，鉴定诱导后的MSCs是否向类心肌细胞转化，利用TUNEL法检测移植细胞的凋亡情况，研究细胞凋亡与心脏泵功能的关系，确定血运重建与细胞凋亡的关系。方法：建立兔心肌梗死模型。实验动物随机分三组：未重建血运组（n=10）心梗后1h在心梗区域注入MSCs；经诱导组（n=10）心梗后1h在心梗区域注入经诱导的MSCs培养液；重建血运组（n=10）心梗后1h在心梗区域注入MSCs并给予血运重建。移植2周后，用荧光显微镜观察移植细胞是否存活，利用心脏彩超对比三组兔心脏泵功能，利用TUNEL法检测三组植入细胞的凋亡率。结果：MSCs于接种后12-24h内贴壁，而大部分造血干细胞及红细胞呈悬浮状态，经数次细胞换液后可将悬浮细胞去除。种植5-6d后，贴壁细胞体积增大呈梭形，有粗大突起伸出，部分细胞呈多角形，除部分细胞单个散在外，细胞多数聚集成集落7-12天，可传代培养。5-氮胞苷诱导MSCs后，第3天发现细胞形态较前更细长，呈梭形。5-氮胞苷诱导MSCs2-4周，细胞表达肌钙蛋白T（trooninT），证明MSCs向心肌细胞转化。MSCs在体外用DAPI标记，用荧光显微镜观察细胞发蓝色荧光，其标记率达100％。移植2周后，在实验组中用荧光显微镜观察在梗死区组织标本中可见DAPI标记带蓝色荧光的供体细胞核，分布比较广泛，形态呈椭圆形类似心肌细胞核，并与心肌纤维排列方向一致，证明移植细胞已存活。移植细胞表达troponinT，证明移植的MSCs分化为类心肌细胞。三组移植细胞均出现细胞凋亡，且血运重建组细胞凋亡率低于另外两组，未血运重建组与经诱导组细胞凋亡率无统计学差异。结论：MSCs容易获得，在体外培养生长旺盛，经5-氮胞苷诱导2-4周后，表达troponinT，证明MSCs向类心肌细胞转化。DAPI是一种较好的标记物，细胞标记率较高几乎达100％，移植2周后，心肌组织中观察到蓝色荧光细胞，形态呈椭圆形类似心肌细胞核，并与心肌纤维排列方向一致，证明移植细胞可存活。toponinT组织免疫组化为阳性，同时证明MSCs向心肌细胞转化。利用TUNEL法检测三组植入细胞的凋亡率，运用心脏彩超对比三组心脏泵功能，血运重建组细胞凋亡率低于另外两组且，细胞凋亡可能以移植细胞的植入区微环境有关。心脏彩超提示血运重建组的泵功能好于另外两组，且与细胞凋亡有相关性。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、正文
• 1、前言
• 2、材料和方法
• 3、结果
• 4、讨论
• 5、结论
• 四、参考文献
• 五、综述
• 致谢