石榴皮总多酚提取、分离纯化、活性及成分分析研究

论文摘要

石榴皮多酚是石榴皮中所有的多酚羟基化合物的总和,石榴皮多酚包括没食子单宁、鞣花单宁、鞣花酸、绿原酸、没食子酸、儿茶素、表儿茶素、花色素、阿魏酸和栎精等多种化合物,它约为干重的百分之十到百分之二十,研究表明,石榴皮多酚具有抗自由基、抗诱变、抗老化和抑菌等作用,它在医药、日用品以及食品等领域都有巨大的作用。本文研究石榴皮多酚的定性和定量分析方法,石榴皮多酚的提取、大孔树脂分离纯化石榴皮多酚工艺,石榴皮多酚体外抗氧化作用,为开发多种不同的功能性食品提供参考依据。论文从下面四部分进行研究。1.石榴皮总多酚的微波辅助提取工艺的响应面法优化研究目的通过微波辅助萃取法从石榴皮中提取多酚类化合物。方法通过单因素试验、响应面优化确定石榴皮多酚提取的最佳工艺条件。结果筛目>100目、料液比1：30,提取温度75℃,提取时间140s、对其提取3次时,多酚粗提物的得率为22.06g/100g。结论该方法比大多传统方法有效。2.大孔树脂分离纯化石榴皮多酚目的通过对D101、DI40、 AB-8、D160、HPD7225树脂研究,希望得出它们吸附性能的差异,找出效果最好的树脂,找其分离纯化最佳的实验条件。方法还通过大孔树脂的动态和静态吸附与解吸研究。结果在5种树脂中,D101树脂有较强的吸附,所以这里用D101树脂来分离纯化石榴皮多酚比较有效,得到了石榴皮多酚纯化的最佳条件为：采用D101大孔树脂,流度为2BV/h,进柱浓度为10mg/mL,清洗用水5BV,乙醇洗脱剂的浓度为70%,其使用量为5.5BV。结论方法分离纯化石榴皮多酚切实可行。3.石榴皮多酚活性研究目的研究石榴皮提取物的体外抗氧化作用。 方法采用羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（·O2-）、2,2-二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）,研究石榴皮提取物及以绿茶多酚、没食子酸为对照,对自由基的清除能力和对小鼠肝组织匀浆脂质过氧化抑制作用。结果石榴皮提取物对羟自由基、超氧阴离子、DPPH自由基的清除作用分别为：IC50=71.37mg/mL、SC50=557.55mg/mL、DC50=31.98mg/mL;没食子酸为：IC50=51.85mg/mL、SC50=289.2mg/mL、DC50=37.65mg/mL;绿茶多酚为：IC50=66.67mg/mL、SC50=1043.91mg/mL、DC50=22.48mg/mL。石榴皮提取物对小鼠肝组织匀浆的脂质过氧化抑制作用EC50=5.21mg/mL、没食子酸EC5o=22.82mg/mL、绿茶多酚EC50=3.47mg/mL。石榴皮多酚纯化物对DPPH·、-OH、·O2和脂质过氧化物的半抑制浓度分别为26.33mg/L、57.86 mg/L、416.31 mg/L、3.69mg/L。结论石榴皮提取物能有效清除羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基,抑制脂质过氧化作用,具有进一步研究和开发价值。4.石榴皮多酚类物质RP-HPLC测定方法的建立及分析目的建立同时测定石榴皮多酚中绿原酸、表儿茶素、鞣花酸和槲皮素含量的理想方法。方法采用反相高效液相色谱法,采用色谱柱Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm, 5μm）,其流动相为乙腈-0.4%磷酸（17：83）,流速为1.0 mL/min,检测波长310 nm,柱温为30℃。同时建立安石榴甙测量方法,色谱柱为Hypersil ODS2 （250nm×4.6nm,5μm大连依利特公司）；流动相为甲醇-2%冰醋酸（7：93）；体积流量为l.OmL/min;检测波长为232 nm；柱温25℃。结果绿原酸、表儿茶素、鞣花酸、槲皮素和安石榴甙在一定浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。其平均回收率分别为100.66%（RSD=2.06%）, 100.05%（RSD=0.58%）、100.05%（RSD=0.51%）、99.51%（RSD=1.22%）和99.79%（RSD=0.52%）。结论该方法简便、准确、可靠、重复性好。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 研究背景
• 2 石榴及石榴皮多酚简介
• 3 石榴皮提取物活性研究
• 3.1 抗氧化作用
• 3.2 抑菌作用
• 3.3 药理作用
• 3.4 其他作用
• 4 石榴皮多酚提取方法
• 4.1 溶剂提取法
• 4.2 微波辅助提取法
• 4.3 超声波辅助提取法
• 4.4 超临界流体萃取法
• 5 研究目的及技术路线
• 5.1 研究目的
• 5.2 技术路线
• 第一章 石榴皮多酚微波辅助提取的响应面法优化
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 主要材料
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 总多酚类物质含量的测定
• 2.2.2 单因素实验设计
• 2.2.3 Box-Behnken实验设计
• 3 结果与分析
• 3.1 单因素实验
• 3.1.1 提取溶剂的筛选
• 3.1.2 筛目的选择
• 3.1.3 提取时间的选择
• 3.1.4 提取温度的选择
• 3.1.5 料液比的选择
• 3.2 响应面实验设计
• 3.2.1 响应面实验
• 3.2.2 响应面分析
• 3.2.3 验证试验
• 4 小结
• 第二章 石榴皮多酚的大孔树脂分离纯化
• 1 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 主要材料
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 石榴皮提取物的准备
• 2.2.2 大孔树脂的处理
• 2.2.3 大孔树脂比较与选择
• 2.2.4 大孔树脂对石榴皮多酚的静态吸附与解吸
• 2.2.5 大孔树脂对石榴皮多酚的动态吸附与解吸
• 2.2.6 纯化后石榴皮多酚含量的测定
• 3 实验结果
• 3.1 大孔树脂比较与选择结果
• 3.2 大孔树脂对石榴皮多酚的静态吸附与解吸实验
• 3.2.1 石榴皮多酚浓度选择
• 3.2.2 乙醇洗脱剂的浓度选择
• 3.3 大孔树脂对石榴皮多酚的动态吸附与解吸实验结果
• 3.3.1 大孔树脂对多酚动态吸附性能
• 3.3.2 树脂清洗用水量实验结果
• 3.3.3 乙醇洗脱剂用量确定
• 3.4 石榴皮多酚纯化后的测定结果
• 4 小结
• 第三章 石榴皮提取物抗氧化活性的研究与比较
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 主要材料
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 石榴皮提取物的获得
• 2.2.2 抗氧化方法
• 2.2.3 石榴皮多酚纯化物抗氧化活性
• 3 结果与讨论
• 3.1 各还原物对各氧化物的清除效果比较
• 3.1.1 对DPPH·（2,2-二苯代苦味酰基自由基）的清除作用
• 3.1.2 对·OH（羟自由基）的清除
• 2^-（超氧阴离子）的清除'>3.1.3 对·O₂^-（超氧阴离子）的清除
• 3.1.4 脂质过氧化抑制作用
• 3.2 石榴皮多酚纯化物抗氧化活性研究结果
• 3.2.1 对DPPH·（2,2-二苯代苦味酰基自由基）的清除作用
• 3.2.2 对·OH自由基的清除率
• 2^-超氧阴离子)的清除'>3.2.3 对·O₂^-超氧阴离子)的清除
• 3.2.4 脂质过氧化抑制作用
• 4 小结
• 第四章 RP-HPLC法测定石榴皮多酚中的多酚物质
• 1 引言
• 2 材料与试剂
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 主要材料
• 2.1.2 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 色谱条件
• 2.2.2 对照品溶液的准备
• 2.2.3 供试品溶液的制备
• 3 实验结果
• 3.1 线性关系考察
• 3.2 精密度试验
• 3.3 稳定性试验
• 3.4 重现性实验
• 3.5 加样回收实验
• 3.6 石榴皮纯化品物质测定
• 3.6.1 纯化品试样制备
• 3.6.2 RP-HPLC法对石榴皮多酚纯化品测量结果
• 4 小结
• 结语
• 1 结论
• 2 实验需完善的地方
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果
• 致谢