刺五加水提物抗抑郁作用及其机理研究

论文摘要

抑郁症是全球性的主要精神卫生问题,随着社会经济的发展,生活节奏加快,人们的压力增加,情感冲击加大,造成抑郁症发病率逐年增长。目前对于抑郁症的病因及病理机制尚不清楚。大量研究表明,慢性应激在抑郁症发病中起重要作用。当前治疗抑郁症的药物主要以西药为主,但存在疗效一般、毒副作用大等缺点,因此开发起效快、毒性小的药物成为该领域的研究重点。在我国,刺五加作为一种药用植物已有悠久的历史,其根、根茎及茎、茎叶与果实均可做药用,古代医者曾应用刺五加的根治疗疲劳和心理等疾病。通过国内外研究学者对刺五加的药理作用等方面作了研究发现刺五加具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗有害应激、提高免疫力、保护心脑血管系统等生物学功能。目前,国内外主要应用刺五加治疗冠心病、心绞痛、缺血清中风、糖尿病和高血压等疾病,而在应用刺五加治疗抑郁症方面的研究罕到报道。本论文采用小鼠高架十字迷宫模型、悬尾模型和大鼠嗜铬瘤细胞抑郁模型,研究刺五加水提物抗抑郁作用及其机制。实验内容和结果如下：1、将36只八周龄昆明小鼠随机分为正常组、模型组和保护组（分别包括地西泮阳性药物对照组、刺五加低剂量、中剂量以及高剂量组）,采用高架十字迷宫实验和悬尾实验建立抑郁小鼠模型。检测抑郁模型小鼠血清中皮质酮的含量变化以及抑郁模型小鼠大脑中CREB蛋白的表达量的变化情况。结果表明,刺五加保护组能显著的降低抑郁模型小鼠血清中皮质酮的含量,提高小鼠大脑中CREB蛋白的表达量。其中500mg/kg刺五加水提物对高架十字迷宫抑郁模型小鼠神经保护作用最显著,而1000mg/kg刺五加水提物对悬尾抑郁模型小鼠神经保护作用最显著。上述研究结果表明,刺五加水提物能够通过调节小鼠体内HPA轴,上调小鼠大脑CREB蛋白的表达发挥抗抑郁的作用。2、利用皮质酮（Cort,200μmol/L）诱导PC12细胞凋亡建立体外抑郁模型,用刺五加水提物处理观察其对PC12细胞的保护作用。结果表明,刺五加水体物能够抑制Cort对PC12细胞的毒性。MTT、LDH实验检测了Cort和刺五加水提物的细胞毒性作用,结果显示,Cort能够降低细胞存活率,破坏细胞膜的完整性,并存在剂量-效应关系。而刺五加水提物对细胞存活率影响不显著,刺五加水体物与Cort共培养细胞能够明显提高细胞的存活率,保护细胞膜的完整性。倒置显微镜和荧光染色检测发现刺五加水提物保护组与Cort损伤组相比细胞存活数量明显增多,凋亡数量明显减少；流式细胞仪分析细胞凋亡率,Cort损伤组细胞凋亡率17.9±3.87%,刺五加（400mg／L）保护组细胞凋亡率为14.8±3.16%；与Cort损伤组PC12细胞内游离钙离子（[Ca2+]i）浓度相比,刺五加保护组PC12细胞内游离钙离子（[Ca2+]i）浓度明显降低：Western blotting检测细胞内CREB蛋白表达量结果表明,Cort损伤组PC12细胞内CREB蛋白表达量明显降低,刺五加水提物能够提高PC12细胞CREB蛋白的表达量。上述结果表明刺五加水提物对Cort诱导PC12细胞的凋亡有保护作用,保护机制体现在保护细胞膜功能,上调CREB蛋白的表达,减少细胞外游离钙内流。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 文献综述
• 1.1 抑郁症概况
• 1.1.1 抑郁症
• 1.1.2 抑郁症的病因及发病机理
• 1.1.3 抑郁症研究模型
• 1.2 抑郁症治疗药物的研究进展
• 1.2.1 常规抗抑郁药物
• 1.2.2 新型抗抑郁药物
• 1.2.3 中医药治抑郁症
• 1.3 刺五加神经保护学研究进展
• 1.3.1 刺五加的化学成分
• 1.3.2 刺五加神经保护作用
• 1.4 本论文的研究意义和主要工作
• 2 刺五加水提物对抑郁模型小鼠的神经保护作用及其机制初探
• 2.1 实验材料及设备
• 2.1.1 实验材料及试剂
• 2.1.2 实验设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 实验动物及饲养
• 2.2.2 实验装置与仪器
• 2.2.3 配置试剂
• 2.2.4 小鼠高架十字迷宫实验
• 2.2.5 小鼠悬尾实验
• 2.2.6 小鼠血清中糖皮质激素（Cort）含量检测
• 2.2.7 小鼠大脑中环腺苷酸应答元件结合蛋白（CREB）表达检测
• 2.2.8 统计学分析
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 刺五加水提物对不同抑郁模型小鼠血清中Cort含量的影响
• 2.3.2 刺五加水提物对抑郁模型小鼠大脑中CREB蛋白表达的影响
• 2.4 讨论
• 2.5 本章小结
• 3 对皮质酮（Cort）诱导PC12细胞凋亡抑郁模型建立的研究
• 3.1 材料与设备
• 3.1.1 实验试剂
• 3.1.2 实验设备
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 细胞培养
• 3.2.2 MTT法测定细胞存活率
• 3.2.3 乳酸脱氢酶释放的检测
• 3.2.4 Hoechst33258荧光染色观察细胞形态变化
• 3.2.5 Annexin V-FITC和PI染色分析细胞凋亡
• 3.2.6 细胞中游离钙离子浓度的检测
• 3.2.7 统计学分析
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 Cort诱导PC12细胞损伤的时间和剂量关系
• 3.3.2 Cort处PC12细胞对LDH释放的影响
• 3.3.3 Hoechst 33258染色观察Cort诱导PC12细胞凋亡
• 3.3.4 Annexin V-FITC和PI双染色分析Cort对PC12细胞凋亡的影响
• 3.3.5 Cort对PC12细胞凋亡中游离钙离子浓度的影响
• 3.4 讨论
• 3.5 本章小结
• 4 刺五加水提物对皮质酮诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
• 4.1 材料与设备
• 4.1.1 实验试剂
• 4.1.2 实验设备
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 细胞培养
• 4.2.2 MTT法测定细胞存活率
• 4.2.3 MTT法测定细胞存活率
• 4.2.4 LDH释放的检测
• 4.2.5 倒置显微镜观察细胞形态
• 4.2.6 Annexin V-FITC和PI双染色分析细胞凋亡
• 4.2.7 细胞内游离钙离子浓度的测定
• 4.2.8 Western blotting检测CREB蛋白
• 4.2.9 统计学分析
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 刺五加水提物对正常PC12细胞的毒性检测
• 4.3.2 刺五加水提物抑制Cort诱导PC12细胞损伤的细胞活力检测
• 4.3.3 刺五加水提物抑制Cort诱导PC12细胞损伤的LDH释放率的测定
• 4.3.4 刺五加水提物抑制Cort诱导PC12细胞损伤的形态学观察
• 4.3.5 刺五加水提物对Cort诱导PC12细胞凋亡的影响
• 4.3.7 刺五加水提物对Cort诱导PC12细胞凋亡细胞中游离钙离子浓度的影响
• 4.3.8 刺五加水提物对Cort诱导PC12细胞中CREB蛋白表达量的影响
• 4.4 讨论
• 4.5 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况
• 致谢