益气解毒颗粒影响鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡活力的实验研究

论文题目: 益气解毒颗粒影响鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡活力的实验研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 中西结合临床耳鼻咽喉

作者: 胡彬雅

导师: 田道法

关键词: 鼻咽癌,益气解毒方,药物血清,细胞株,增殖抑制,凋亡诱导

文献来源: 湖南中医药大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的：观察益气解毒方原方及拆方药物血清对人鼻咽癌细胞增殖活性和凋亡活性的影响,从细胞凋亡诱导和增殖抑制效应角度探讨其抗肿瘤作用的机制。方法：制备益气解毒方原方组(Ⅰ组)及该方中的益气组分组(Ⅱ组)、解毒组分组(Ⅲ组)、养阴组分组(Ⅳ组)、其它组分组(Ⅴ)药物血清,分别作用于体外培养的人鼻咽癌细胞株HNE1后,采用MTT法检测实验细胞的增殖活性变化,流式细胞术检测其细胞凋亡活性和细胞周期效应,免疫细胞化学法检测细胞的增殖细胞核抗原PCNA和抑癌基因P53活性表达变化。结果：(1)随药物血清浓度的升高,对细胞增殖活性的抑制作用进一步增强。原方组和解毒组分组药物血清作用在48 h时细胞增殖活性最低,细胞生长受到明显抑制,而益气组分组、养阴组分组、其它组分组药物血清在作用72 h时细胞增殖活性最低,细胞生长受到明显抑制。15%正常大鼠血清,无论血清灭活与否,均能维持鼻咽癌细胞正常生长。(2)与对照组相比(甲氨喋呤组),原方组15%药物血清G1期细胞比例高于对照组,G2和S期细胞比例均低于对照组。对组内细胞周期分布情况进行比较,各组的G1期细胞比例均远高于G2+S期细胞比例,同时,S期细胞比例也远高于G2期细胞比例。与对照组相比,原方组和益气组分组15%药物血清在24h、48 h对HNE1细胞具有明显的凋亡诱导活性。且随着药物血清作用时间的延长,各组的凋亡指数均有一定程度的升高。(3)各组15%药物血清分别作用24 h、36 h、48 h后,HNE1细胞的PCNA显色均较对照组浅,呈低表达状态,且PCNA表达活性随药物血清作用时间的延长而呈进一步降低趋势。各组15%药物血清作用24 h后,HNE1细胞的P53显色结果均较对照组深,而在作用36 h、48 h后,则其活性表达下降,且可见呈片状分布的大量坏死细胞,其中夹杂有零星的P53阳性细胞,并以原方组和解毒组分组更为明显。结论：益气解毒方具有抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的效应。抑制PCNA的合成,促进P53蛋白表达可能是益气解毒方抑制鼻咽癌的机理之一。其中,原方诱导鼻咽癌细胞凋亡效应,与其益气组分的功效有密切关系。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

引言

第一部分 材料与方法

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 细胞株

1.3 主要试剂

1.4 主要仪器设备

2 实验方法

2.1 药液的制备

2.2 药物血清的制备

2.3 细胞培养液的制备

2.4 细胞培养

2.5 MTT比色法检测细胞增殖活性抑制实验

2.6 细胞周期效应和凋亡诱导活性的流式细胞仪检测

2.7 PCNA和P53表达活性的细胞免疫化学检测

3 统计方法

第二部分 结果与分析

1 MTT比色法检测细胞增殖活性抑制实验

1.1 不同浓度、不同时相药物血清对细胞增殖活性的影响

1.2 15%正常大鼠血清和15%药物血清对细胞增殖活性的影响

2 各组15%药物血清对HNE1细胞周期效应和凋亡诱导活性的影响

3 各组15%药物血清对HNE1细胞PCNA、P53表达的影响

第三部分.讨论

1 中医学对鼻咽癌的认识

2 益气解毒方组方原则及依据

2.1 导师的学术观点

2.2 本方所用中药的药效学依据

2.3 通过拆方来探讨原方的作用机制

3 中药血清药理学方法利于研究中药复方

4 益气解毒方对鼻咽癌细胞增殖活性的影响

5 益气解毒方对鼻咽癌细胞凋亡活性的影响

6 益气解毒方对鼻咽癌细胞PCNA和P53和活性的影响

结论

参考文献

致谢

文献综述

中医药促进细胞凋亡机理研究进展

参考文献

发布时间: 2011-03-30

参考文献

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