益气活血、化瘀通络之中药对肾间质纤维化的作用研究

论文摘要

目的:肾间质纤维化（tubulointerstitial,TIF）是各种原因所致肾脏疾病进展至终末期肾功能衰竭的共同病理特征[1]。大量临床病理资料表明,各种原因引起的慢性肾功能损伤与肾小管间质纤维化病变的严重程度较与肾小球病变的关系更为密切。而细胞外基质（extracellular martix,ECM）的合成和降解失衡,造成其大量积聚是引起肾间质纤维化的主要原因[2]。临床上应用血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin-converting enzyme inhibitor,ACEI）、血管紧张素II受体拮抗剂（angiotensin II receptor antagonist,ARB）等药物,通过调节ECM合成、降解来防治TIF,但循证医学已证明,上述药物在血肌酐高于一定值时,对肾脏不但无保护作用,还能加重其损害,且药价偏高,因而使其应用受限。因此寻找具有多途径多靶点治疗作用、安全低成本的药物对肾间质纤维化的防治有重要的意义。本实验应用导师经验方龙甲参芪汤对单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obsurtction,UUO）诱导的肾间质纤维化大鼠模型进行干预性治疗,并以ARB类药物缬沙坦（Valsartna）为对照,旨在通过观察龙甲参芪汤对实验动物梗阻侧肾脏组织形态学及转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）、III型胶原（collagenIII,ColIII）及其受体的影响,探讨中药复方—龙甲参芪汤对肾间质纤维化的拮抗作用及可能的作用机制。方法:本实验研究选用雄性SD大鼠40只,适应性饲养一周后,分别置代谢笼里取尿,测定尿蛋白及尿红细胞全部阴性,随机分为4组,假手术组（SHAM group）、模型组（UUO group）、缬沙坦组（UUOV group）、龙甲参芪汤（UUOL group）组,每组10只,除假手术组外,各组动物均结扎左侧输尿管并在术前一天灌胃给药,假手术组与模型组分别灌入等量的生理盐水,于结扎后第15天用全自动生化分析仪测各组大鼠的血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）,杀检测肾/体比（Index）,并取左侧肾脏行病理切片,光镜下观察各组大鼠肾间质及肾小管的变化情况,免疫组化法检测TGF-β1、ColIII在肾间质及肾小管的表达情况,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果:1 Index、SCr、BUN检测结果。实验结束时,左侧肾脏体积增大,大鼠Index模型组比假手术组明显升高（p<0.01）,缬沙坦组及龙甲参芪汤组与模型组比较显著降低（p<0.05,p<0.05）,其中缬沙坦组较龙甲参芪汤组略低,但两组间无统计学意义（p>0.05）。SCr测定结果显示,模型组明显高于假手术组（p<0.05）,缬沙坦组、龙甲参芪汤组大鼠的SCr与模型组比较显著降低（p<0.05,p<0.05）,其中缬沙坦组的SCr低于龙甲参芪汤组,但无统计学意义（p>0.05）。BUN测定结果显示,模型组大鼠BUN明显高于假手术组（p<0.05）,缬沙坦组、龙甲参芪汤组与模型组相比显著降低（p<0.05,p<0.05）,其中缬沙坦组BUN低于龙甲参芪汤组,但无统计学意义（p>0.05）。2肾组织HE及天狼猩红染色显示:模型组间质大量炎性细胞浸润和纤维组织增生,肾小管部分萎缩、管腔闭塞或扩张,肾小球数目明显减少,面积缩小,肾小囊黏连或扩张,小囊周围大量纤维组织增生。各治疗组间质可见多少不等的炎性细胞浸润,少量纤维组织增生,肾小管轻度扩张,部分肾小球轻度萎缩,小囊扩张,肾小球数量无明显改变。3 TGF-β1在肾组织的表达、分布及半定量分析结果:TGF-β1主要在梗阻肾近曲小管上皮细胞胞浆及间质细胞内呈强阳性表达,假手术组实验动物在肾小管上皮细胞内TGF-β1蛋白为弱阳性,其余各组在肾小管上皮细胞、间质细胞及肾小球内表达显著增强,其中模型组较假手术组TGF-β1的阳性面积及积分光密度值均呈显著性升高（p<0.01）,缬沙坦组、龙甲参芪汤组与模型组相比,TGF-β1的阳性面积及积分光密度均呈显著性下降（p<0.01,p<0.01）,提示龙甲参芪汤、缬沙坦均可抑制梗阻侧肾组织TGF-β1的表达,缬沙坦组优于龙甲参芪汤组,但无显著性差异（p>0.05）。4 ColIII在肾组织的表达、分布及半定量分析结果:ColIII主要表达于梗阻肾的间质细胞内。假手术组大鼠肾间质ColIII呈弱阳性表达,其余各组表达显著增强,为条索状或成片块状。其中,模型组与假手术组相比ColIII的阳性面积及积分光密度值呈显著性升高（p<0.01）,缬沙坦组、龙甲参芪汤组与模型组相比,ColIII的阳性面积及积分光密度值均呈显著性下降（p<0.01,p<0.01）,提示龙甲参芪汤、缬沙坦均可抑制梗阻侧肾组织中ColIII的组织表达,其中,缬沙坦组优于龙甲参芪汤组,但无显著性差异（p>0.05）。5肾间质纤维化面积半定量分析结果模型组肾间质纤维化程度较假手术组明显加重（p<0.01）;缬沙坦组、龙甲参芪汤组与模型组比较,肾间质纤维化面积明显减少（p<0.01,p<0.05）,提示龙甲参芪汤及缬沙坦均有拮抗肾间质纤维化的作用。其中,缬沙坦组优于龙甲参芪汤组,但无显著性差异（p>0.05）。结论:1龙甲参芪汤能降低血清肌酐、尿素氮,降低肾脏指数,保护肾功能。2龙甲参芪汤能抑制TGF-β1、ColIII在肾组织的表达,从而减少病变肾组织ECM成分的合成及积聚,延缓肾间质纤维化的进程。3龙甲参芪汤对UUO大鼠肾间质纤维化的拮抗作用与缬沙坦基本相似。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 龙甲参芪汤对肾间质纤维化的作用机制研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 肾间质纤维化的研究进展
• 致谢
• 个人简历