重组人可溶性APRIL及其突变体的制备与功能分析

重组人可溶性APRIL及其突变体的制备与功能分析

论文摘要

增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand, APRIL)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的新成员之一,全长为250 个氨基酸,属Ⅱ型跨膜蛋白,通过与其受体结合而发挥生物学作用。近年研究表明,APRIL 密切参与了促进多种恶性肿瘤细胞增殖、延长恶性肿瘤细胞存活及加速肿瘤形成等多个过程。因此,该分子有望成为多种恶性肿瘤治疗时进行药物设计的新靶点,设法有效抑制APRIL 的功能活性,将有可能为相关肿瘤的治疗提供崭新途径。为此我们克隆和表达了重组人可溶性APRIL(soluble APRIL,sAPRIL)分子,在与TALL-1 ( TNF and apoptosis ligand-related leukocyte-expressed ligand 1,又称BLyS 或BAFF ) 同源序列比对基础上进行突变位点设计,借助一步反向PCR 致突变法构建人sAPRIL cDNA 的两个突变体,进而对sAPRIL 及其突变体蛋白进行表达、纯化及生物学活性检测。取得的主要结果如下: 1. 经RT-PCR 成功地克隆了编码人APRIL 胞外区105-250 的cDNA(即sAPRIL cDNA),经查对,与GenBank 上登录的编码相应APRIL 胞外区cDNA 的序列完全一致。2. 以获得的pUC19/sAPRIL 为模板,经一步反向PCR 法成功构建了缺失编码第187 位谷氨酰胺的CAA 和以编码甘氨酸的GGA 替换CAA 的两个突变体cDNA,分别命名为pUC19/msAPRIL1 和pUC19/msAPRIL2。3. 将上述测序正确的野生型和突变型目的片段分别连接于原核表达质粒pQE-80L,成功地构建了重组原核表达质粒pQE-80L/sAPRIL、pQE-80L/msAPRIL1 和pQE-80L/msAPRIL2。4. 将上述质粒分别转化大肠杆菌DH5α,经IPTG 诱导,均获得了较高水平的表达,并确立sAPRIL 及其突变体msAPRIL 1、msAPRIL 2 在大肠杆菌中高效表达的最佳诱导表达条件均为终浓度1mmol/L 的IPTG 在37℃诱导表达4h。SDS-PAGE 分析可见,各重组蛋白的大小均约为19kDa,主要是以包涵体的形式存在。Western blotting分析显示,各目的蛋白均在分子量约19kDa 处出现单一条带。5. 经Ni2+-NTA 纯化系统及尿素透析,各重组蛋白得到了有效纯化和复性。纯化蛋白在SDS-PAGE 上呈现单一条带。6. 生物学活性分析显示,所制备的重组人sAPRIL 有明显促进人A549 肺癌细胞

论文目录

  • 英文缩写一览表
  • 英文摘要
  • 中文摘要
  • 论文正文 重组人可溶性APRIL 及其突变体的制备与功能分析
  • 前言
  • 技术路线
  • 第一部分 重组人sAPRIL 的克隆与表达
  • 材料
  • 方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第二部分 重组人sAPRIL 突变体(msAPRIL)的设计与制备
  • 材料
  • 方法
  • 结果
  • 讨论
  • 第三部分 重组人sAPRIL 及其突变体的功能分析
  • 材料
  • 方法
  • 结果
  • 讨论
  • 全文小结
  • 致谢
  • 照片
  • 参考文献
  • 文献综述 增殖诱导配体(APRIL)研究进展
  • 参考文献
  • 攻读硕士学位期间发表的文章
  • 相关论文文献

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    • [4].肿瘤相关中性粒细胞释放APRIL对胰腺癌细胞增殖活性的影响[J]. 中国普外基础与临床杂志 2020(08)
    • [5].特发性膜性肾病患者血清增殖诱导配体水平的测定及临床意义[J]. 中国全科医学 2020(14)
    • [6].系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎患者外周循环中APRIL表达水平的检测和意义[J]. 检验医学 2008(02)
    • [7].儿童急性淋巴细胞白血病中BAFF、APRIL及其受体的表达研究[J]. 中国免疫学杂志 2014(07)
    • [8].慢病毒介导RNAi抑制大肠癌细胞APRIL表达对化疗敏感性的影响[J]. 南方医科大学学报 2011(09)
    • [9].特发性血小板减少性紫癜患者BAFF和APRIL表达及意义[J]. 医学研究杂志 2010(05)
    • [10].特发性血小板减少性紫癜患者血清及树突状细胞分泌APRIL、BAFF研究[J]. 中国免疫学杂志 2010(08)
    • [11].淫羊藿苷与黄芩苷联合多柔比星对肝癌细胞APRIL表达和血管内皮细胞生长抑制的研究[J]. 中华肿瘤防治杂志 2009(20)
    • [12].丙种球蛋白对儿童川崎病BLyS和APRIL水平的影响[J]. 江苏医药 2015(23)
    • [13].系统性红斑狼疮患者血清增殖诱导配体水平的检测及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版) 2011(01)
    • [14].食管鳞癌患者外周血中APRIL mRNA的表达意义[J]. 中国肿瘤临床与康复 2008(04)
    • [15].艾迪注射液与沙利度胺对老年多发性骨髓瘤患者血清APRIL、β2-m和TPO水平的影响[J]. 现代生物医学进展 2015(31)
    • [16].乳酸菌对Caco-2细胞分泌APRIL和IL-10的影响[J]. 中国农业科学 2012(09)
    • [17].原发性胆汁性肝硬化患者外周血APRIL/BLyS系统及其受体的表达[J]. 第二军医大学学报 2010(10)
    • [18].结直肠癌组织APRIL表达检测方法的比较[J]. 齐齐哈尔医学院学报 2010(19)
    • [19].血清APRIL表达水平与非霍奇金氏病相关性的初步研究[J]. 现代检验医学杂志 2008(03)
    • [20].纳豆芽孢菌剂对放养初期黑天鹅血液中IL-10和APRIL含量的影响[J]. 中国兽医杂志 2017(10)
    • [21].5th International Academic Conference on Environmental and Occupational Medicine[J]. 环境与职业医学 2010(01)
    • [22].Announcement of the 5th International Academic Conference on Environmental and Occupational Medicine[J]. 环境与职业医学 2010(02)
    • [23].血清BAFF、APRIL水平与原发性胆汁性肝硬化的关系[J]. 山东医药 2010(49)
    • [24].PS-341对多发性骨髓瘤细胞分泌BAFF与APRIL及迁移能力的影响[J]. 航空航天医药 2010(06)
    • [25].亚砷酸联合T-VAD方案对老年多发性骨髓瘤患者血清APRIL、β2-m和TPO水平的影响[J]. 中国生化药物杂志 2014(05)
    • [26].糖皮质激素和硼替佐米体外干预多发性骨髓瘤细胞BAFF/APRIL mRNA表达的初步探索[J]. 中国实验血液学杂志 2011(06)
    • [27].儿童急性B淋巴细胞白血病APRIL及其受体mRNA水平的定量测定[J]. 交通医学 2010(04)
    • [28].原发性肝癌APRIL表达与临床病理生理特点[J]. 中国热带医学 2009(01)
    • [29].APRIL在实验性自身免疫性心肌炎大鼠心肌组织中的表达及意义[J]. 武汉大学学报(医学版) 2008(02)
    • [30].结肠癌及癌前病变中APRIL和caspase-3蛋白的表达及其作用[J]. 中国医药导报 2016(14)

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