论文摘要
研究背景:系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus, SLE）是一种与诸多因素有关的自身免疫性疾病,好发于女性,育龄期女性尤甚。雌激素通过与其特异性受体结合发挥效应,其参与SLE的发生发展已得到广泛认同,但雌激素及其受体在SLE炎性病变中的作用机理研究还很薄弱,尚无统一论断。目的:通过对雌激素受体（estrogen recetors, ERs）在女性SLE患者外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）中表达类型的分析,了解其与女性SLE的相关性;进一步分析患者血浆中雌二醇（estradiol, E2）及炎性细胞因子的表达水平,探讨其与ER亚型及疾病活动性指标是否有相关性;同时体外用E2处理SLE患者PBMCs,了解E2对PBMCs分泌炎性因子的影响,以此揭示ERs在女性SLE炎性病变中的作用及其机理。方法:1.收集68例女性SLE患者和47例健康女性肝素抗凝的空腹静脉血,无菌分离血浆和PBMCs,并收集SLE患者的临床资料。2. PBMCs采用逆转录多聚酶联反应（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）法检测PBMCs中ERαmRNA、ERβmRNA的表达,间接免疫荧光法检测ERs蛋白的表达,分析ERs与女性SLE的相关性。3.用终浓度为1×10-6mol/L的E2处理SLE PBMCs 8例48h,镜下观察确定无污染后,收集培养上清。4.采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测血浆和培养上清中IL-10、IL-17、TNF-α的浓度,采用化学发光免疫分析法检测血浆中E2的浓度,分析上述检测指标与ER亚型及部分SLE活动性指标（SLEDAI、ESR、C3）的相关性。结果:1.女性SLE患者PBMCs中ERs mRNA水平的表达:ERα、ERβ共表达者17例（17/68, 25.0%）、仅表达ERα3例（3/68, 4.0%）、仅表达ERβ38例（38/68, 56.0%）、ERα和ERβ均不表达10例（10/68, 15.0%）;正常对照ERα、ERβ共表达者9例（ 9/47, 19.1%）、仅表达ERα2例（2/47, 4.3%）、仅表达ERβ25例（25/47, 53.2%）、ERα和ERβ均不表达11例（11/47, 23.4%）,SLE患者PBMCs中ERs蛋白水平的表达:ERα、ERβ共表达者12例（12/47, 25.5%）、仅表达ERα2例（2/47, 4.3%）、仅表达ERβ21例（21/47, 44.7%）、ERα和ERβ均不表达12例（12/47, 25.5%）;正常对照ERα、ERβ共表达者7例（7/34, 20.6%）、仅表达ERα1例（1/34, 3.0%）、仅表达ERβ13例（13/34, 38.2%）、ERα和ERβ均不表达13例（13/34, 38.2%）。SLE组与正常对照组没有显著差异（P>0.05）。无论是SLE或者正常对照,其PBMCs中ERs mRNA的表达与蛋白的表达相吻合（P>0.05）。2. SLE血浆中E2中位浓度为74.00 pg/m（l38.50pg/ml-180.25pg/ml）,IL-10中位浓度为5.97 pg/ml（4.31pg/ml-9.49pg/ml）,IL-17中位浓度为10.14 pg/ml（7.47pg/ml-11.82pg/ml）,TNF-α中位浓度为17.05 pg/ml（7.95pg/ml-21.02pg/ml）,正常人血浆中E2中位浓度为27.50 pg/ml（ 10.00pg/ml-87.75pg/ml ） , IL-10中位浓度为3.95pg/ml（ 2.82pg/ml-5.38pg/ml ） , IL-17中位浓度为5.92pg/ml（ 4.89pg/ml-9.79pg/ml ） , TNF-α中位浓度为7.95pg/ml（3.86pg/ml-11.59pg/ml）,SLE患者血浆中上述分子浓度显著高于正常对照（P<0.05）。3. PBMCs中ERα和ERβ共表达的SLE患者血浆中IL-17水平（12.58 pg/ml±6.02 pg/ml）高于仅表达ERβ者（9.02 pg/ml±2.84 pg/ml）,差异有统计学意义（P<0.05）,而正常对照组之间两者没有显著差异（P>0.05）。血浆中IL-10和TNF-α的水平在两组内不同表达类型之间均无显著差异（P>0.05）。4. SLE血浆中E2、IL-10、IL-17、TNF-α水平与SLEDAI、ESR、C3间没有显著的相关性（P>0.05）,E2水平与IL-10、IL-17、TNF-α水平亦无显著相关性（P>0.05）。5. PBMCs经浓度为1×10-6mol/L的E2处理48h后,其培养上清中IL-10、IL-17的浓度与未用E2处理相比是增高的,而TNF-α的浓度则是降低的,不过差异没有统计学意义（P>0.05）。结论:1. ERs在基因水平和蛋白水平的分析均表明女性SLE患者PBMCs中以单独表达ERβ为主。2.女性SLE患者PBMCs中不同类型ER表达的构成与正常对照没有差异。3.女性SLE患者血浆中E2、IL-10、IL-17、TNF-α显著高于正常对照,说明E2和上述炎性因子可能参与了SLE的病理生理过程。4.虽然女性SLE患者血浆中E2、IL-10、IL-17、TNF-α水平显著高于正常对照,但其与部分评价SLE疾病活动性的指标没有显著相关性。5.在女性SLE患者PBMCs中,一定浓度的E2可能通过抑制TNF-α、促进IL-10、IL-17的合成参与SLE的病理过程。
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标签：系统性红斑狼疮论文; 雌激素论文; 受体论文; 外周血单个核细胞论文; 细胞因子论文;