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狂犬病病毒保护性抗原基因重组伪狂犬病毒/杆状病毒活疫苗的实验研究

2020-12-11阅读(492)

狂犬病病毒保护性抗原基因重组伪狂犬病毒/杆状病毒活疫苗的实验研究

论文摘要

狂犬病是以恐水、畏光和狂躁等症状为特征的一种古老的人畜共患病。几乎所有温血动物都能感染狂犬病病毒（Rabies virus, RABV）并造成中枢神经系统损伤,形成致死性的脑脊髓炎。在发达国家,通过对犬的严格管理和预防免疫,已基本消除了犬狂犬病,从而有效控制住了人类狂犬病。在中国,犬是狂犬病病毒侵入人群的主要传染源和传播媒介,由犬传播导致人感染的病例约占狂犬病总数的85%-90%。因此,控制犬狂犬病并使人类免受狂犬病病毒的侵害,主要手段仍是犬的常规免疫以及人类的暴露前、暴露后免疫。本研究对兽用狂犬病病毒新型活疫苗进行了新的探索,主要研究内容如下：1.表达狂犬病病毒ERA株和CTN株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒PRV-（TK-/gE-/2G+）的构建、鉴定及免疫研究伪狂犬病病毒具有清楚的遗传背景、稳定的遗传特点、广泛的宿主范围、较高的增殖滴度、较大的外源基因插入容量（可容纳至少40kb）及不感染人等优点。因此本研究以伪狂犬病病毒Ea株的TK-/gE-/LacZ+变异株为载体构建重组病毒PRV-（TK-/gE-/2G+）,并经PCR、southern blot和western blot鉴定正确。重组病毒免疫Balb/c小鼠,首免后3周就能检测到针对糖蛋白的ELISA抗体,二免后2周ELISA抗体有所升高但差异不显著,MTS的结果显示重组病毒激发机体产生了较高的细胞免疫,但未检测到狂犬病病毒中和抗体。重组病毒免疫犬,犬很敏感,均在两周内死亡,表明该致弱的伪狂犬病病毒载体对犬的安全性有待商榷。2.表达狂犬病病毒SRV9株核蛋白和糖蛋白的重组伪狂犬病病毒PRV-（Bartha-SN-SG）的构建、鉴定及免疫研究基于前期的伪狂犬病病毒对犬的安全性的考虑,改用天然致弱,后期缺失毒力因子gG的伪狂犬病病毒Bartha-gG-/EGFP+株为载体构建重组病毒PRV-（Bartha-SN-SG）,并经荧光显微镜观察、PCR和western blot鉴定构建正确。重组病毒免疫Balb/c小鼠,首免后3周能检测到针对糖蛋白的ELISA抗体,二免后2周ELISA抗体升高但差异不显著,MTS的结果显示重组病毒激发了较高的细胞免疫,但中和抗体均为阴性。重组病毒以105TCID50免疫犬,免疫原性略差,中和抗体均为阴性,但该致弱重组病毒未对犬表现出致病性。3.表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组杆状病毒BV-VSV/G-G的构建、鉴定及免疫研究研究发现杆状病毒不能感染哺乳动物细胞,但是可以进入多种哺乳动物细胞中,通过合适的哺乳动物启动子表达外源基因,自身的基因组并不复制和表达,但是哺乳动物血清中的补体系统能抑制杆状病毒。已有研究发现膜上展示有水泡性口炎病毒融合糖蛋白（VSV-G）的杆状病毒粒子对补体系统有极强的耐受性,并能利用VSV-G的融合作用介导细胞间的融合。因此本研究构建了表面展示有VSV-G的表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组杆状病毒并对所构建的重组病毒进行免疫效力研究。重组病毒免疫ICR小鼠,首免后3周和二免后2周ELISA抗体及MTS刺激指数均超过伪狂犬重组病毒,二免后两周可检测到狂犬病病毒中和抗体（VNA>0.5 IU/mL）,最高可达10.26 IU/mL,并呈剂量依赖性。重组杆状病毒免疫犬,均能产生中和抗体（VNA>0.5 IU/mL）,但中和抗体水平个体差异比较大。获得的三株重组病毒做比较,表明重组杆状病毒作为RABV候选疫苗株更具有良好的应用前景。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 第一篇 文献综述
  • 第1章 狂犬病病毒分子生物学研究进展
  • 第2章 伪狂犬病病毒的细胞生物学和分子特征研究进展
  • 第3章 杆状病毒在昆虫和哺乳动物细胞中作为高效载体的研究进展
  • 第二篇 研究内容
  • -/gE-/2G+）的构建、鉴定及免疫研究'>第1章 表达狂犬病病毒ERA株和CTN株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒PRV-（TK-/gE-/2G+）的构建、鉴定及免疫研究
  • 1 材料
  • 2 重组病毒的构建
  • -/gE-/2G+重组病毒的鉴定'>3 TK-/gE-/2G+重组病毒的鉴定
  • 4 动物实验
  • 5 结果
  • 6 讨论
  • 7 小结
  • 第2章 表达狂犬病病毒SRV9株的核蛋白和糖蛋白的重组伪狂犬病病毒PRV-（Bartha-SN-SG）的构建、鉴定及免疫研究
  • 1 材料
  • 2 重组病毒的构建
  • 3 重组病毒的鉴定
  • 4 动物实验
  • 5 结果
  • 6 讨论
  • 7 小结
  • 第3章 表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组杆状病毒BV-VSV/G-G的构建、鉴定及免疫研究
  • 1 材料
  • 2 重组杆状病毒的构建
  • 3 动物实验
  • 4 结果
  • 5 讨论
  • 6 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 作者简介
  • 导师简介
  • 致谢

    • 相关论文文献

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    • [3].杆状病毒——高效蛋白表达载体[J]. 中国预防兽医学报 2009(10)
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    • [6].杆状病毒疫苗载体的应用研究进展[J]. 微生物学免疫学进展 2011(03)
    • [7].杆状病毒在害虫控制中的应用策略[J]. 安徽农业科学 2009(21)
    • [8].生物防治杆状病毒基因工程研究进展[J]. 生物技术通讯 2009(04)
    • [9].昆虫杆状病毒基因组学研究进展[J]. 河南农业科学 2018(09)
    • [10].昆虫杆状病毒作为外源基因表达载体的应用[J]. 中国家禽 2008(11)
    • [11].广西甘蔗杆状病毒的分子检测及分布调查[J]. 南方农业学报 2015(11)
    • [12].杆状病毒介导的哺乳动物细胞基因转移及其影响因素[J]. 微生物学杂志 2009(03)
    • [13].杆状病毒/哺乳动物基因转移载体应用于活载体疫苗研究的进展[J]. 中国人兽共患病学报 2010(03)
    • [14].昆虫杆状病毒几丁质酶及其应用研究进展[J]. 昆虫学报 2008(04)
    • [15].杆状病毒-昆虫细胞技术在人用重组蛋白疫苗生产中的应用[J]. 中国生物制品学杂志 2013(12)
    • [16].杆状病毒与昆虫和沙雷氏菌间的几丁质酶基因密码子使用模式分析[J]. 蚕业科学 2018(02)
    • [17].狂犬病病毒磷蛋白在杆状病毒中的表达及鉴定[J]. 动物医学进展 2016(05)
    • [18].猪瘟病毒囊膜蛋白在杆状病毒表面的展示及展示蛋白的免疫原性试验[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2009(12)
    • [19].Andermatt公司打算将双杆状病毒产品推向市场[J]. 农药研究与应用 2011(02)
    • [20].杆状病毒表达载体的应用现状[J]. 微生物学通报 2018(02)
    • [21].狂犬病病毒磷蛋白在杆状病毒系统的表达及鉴定[J]. 中国动物传染病学报 2012(02)
    • [22].猪流行性腹泻病毒主要结构蛋白在杆状病毒中的表达及免疫原性分析[J]. 畜牧与兽医 2014(11)
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    • [26].狂犬病病毒糖蛋白在Bac-to-bac杆状病毒系统中的表达及应用[J]. 中国预防兽医学报 2011(05)
    • [27].昆虫杆状病毒的增效蛋白[J]. 病毒学报 2010(05)
    • [28].猪繁殖与呼吸综合征病毒兰州分离株ORF3基因的克隆及杆状病毒载体的构建[J]. 西北农业学报 2009(03)
    • [29].广谱昆虫杆状病毒生物农药研究与应用进展[J]. 华中昆虫研究 2015(00)
    • [30].猪流行性腹泻病毒N蛋白杆状病毒表达与间接ELISA方法建立[J]. 中国兽医杂志 2016(05)

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