论文摘要
目的：建立小鼠TNBS结肠炎模型，检测MPO活性、TNF-α水平、p-JNK表达及结肠上皮细胞凋亡程度。利用JNK阻断剂SP600125及益生菌VSL#3干预TNBS结肠炎，探讨JNK通路在小鼠TNBS结肠炎中的作用。方法：取BALB／c小鼠，随机分成对照组、TNBS结肠炎组、SP600125组、VSL#3组，以2.5mg TNBS50％乙醇溶液灌肠造模，SP600125组在灌肠前30min，灌肠后24、48、72小时腹腔注射SP600125（30mg／Kg），VSL#3组于灌肠前2日开始管喂VSL#3（2mg／d）共5天，每日行DAI评分。灌肠后第3天处死小鼠，结肠大体评分、组织学评分，比色法测定结肠匀浆液中MPO活性，ELISA测定结肠组织中TNF-α的含量，免疫组化法测定结肠组织中p-JNK表达，TUNEL检测结肠上皮细胞凋亡指数（AI）。结果：1．DAI评分：TNBS结肠炎组小鼠自灌肠之日起增高，且明显高于正常对照组，SP600125组及VSL#3组评分值低于TNBS结肠炎组；2．大体评分：TNBS结肠炎组（5.00±2.27）高于对照组（0.50±0.53）（p＜0.05），SP600125组（2.13±1.25）与VSL#3组（2.50±1.41）均低于TNBS结肠炎组（p＜0.05），VSL#3组与SP600125组无差异（p＞0.05）；3．组织学评分：TNBS结肠炎组（3.13±0.83）高于对照组（0.63±0.52）（p＜0.05），SP600125组（1.38±0.52）与VSL#3组（1.88±0.64）均低于TNBS结肠炎组（p＜0.05），VSL#3组与SP600125组无差异（p＞0.05）；4．MPO活性：TNBS结肠炎组（4.31±0.69u／g）高于对照组（1.75±0.21u／g）（p＜0.05），SP600125组（1.75±0.21u／g）与VSL#3组（3.86±0.29 u／g）均低于TNBS结肠炎组（p＜0.05），VSL#3组较SP600125组高（p＜0.05）；5．结肠匀浆TNF-α浓度：TNBS结肠炎组（211.11±46.73pg／mg）高于对照组（90.60±24.25pg／mg）（p＜0.05），SP600125组（149.74±41.34pg／mg）低于TNBS结肠炎组（p＜0.05），VSL#3组（187.53±30.64pg／mg）与TNBS结肠炎组无差异（p＞0.05），而与SP600125组无明显差异（p=0.05）；6．p-JNK的IOD值：TNBS结肠炎组（28.06±2.15）较对照组（6.83±1.28）显著增高（p＜0.01），SP600125组（13.27±1.47）明显低于TNBS结肠炎组及VSL#3组（p＜0.01），VSL#3组（26.32±2.53）与TNBS结肠炎组无统计学差异（p＞0.05）；7．结肠上皮细胞AI：TNBS结肠炎组（16.75±1.98）高于对照组（3.38±0.92）（p＜0.05），SP600125组（8.88±2.36）及VSL#3组（13.75±2.71）均比TNBS结肠炎组低（p＜0.05），VSL#3组较SP600125组高（p＜0.05）；8．相关性分析：小鼠结肠匀浆MPO活性与p-JNK的表达正相关（r=0.738，p＜0.05），TNF-α含量与p-JNK的表达正相关（r=0.738，p＜0.05），结肠上皮细胞AI与p-JNK的表达正相关（r=0.788，p＜0.05）。结论：JNK信号通路参与了TNBS结肠炎的病理过程。SP600125通过抑制JNK信号通路，减轻TNBS结肠炎病变，降低MPO、TNF-α水平，减少p-JN表达，减少结肠上皮细胞凋亡。由于TNBS结肠炎模型与人类CD相似，SP600125有可能成为治疗CD的新生物制剂。