利用屠宰场孕马子宫提取纯化PMSG及其血浆PMSG提纯工艺的研究

论文摘要

孕马血清促性腺激素（Pregnant Mare’s Serum Gonadotropin,PMSG）,也叫马绒毛膜促性腺激素（Equine Chorionic Gonadotropin, eCG）,是从怀孕40天～120天的母马血清中提取出来的一种促性腺激素,它是由子宫内膜孔洞分泌产生,为糖蛋白质,分子量约53000。它主要具有类似于促卵泡素（follicle-stimulating hormone,FSH）和促黄体素（luteinizingh ormone,LH）的双重作用,可促进众多卵泡的生成、成熟和排卵。目前PMSG的工业化生产的原料主要来自于妊娠40天～120天的健康母马血浆。为探索开发PMSG工业化生产原料的新途径,本试验以妊娠40天～120天的健康母马子宫为材料,对提取PMSG提取工艺进行了研究,并就孕马子宫粘膜中提取PMSG和由孕马血浆中提取PMSG的效价水平进行对比。试验一旨在探索妊娠40天～120天的健康母马子宫黏膜及分泌物中所含PMSG的含量、效价以及提取PMSG的工艺。本实验采用妊娠66天健康母马子宫一个,刮取杯状细胞所在区域的黏膜组织,利用蛋白质提取方法,结合现有工艺提取PMSG。在提取过程中,探讨了酸度、温度和偏磷酸对PMSG提取工艺的影响等问题。结果表明,怀孕60天的孕马子宫黏膜其中所含PMSG的效价为2800IU/ml（透析液）,工艺中所涉及的温度、酸度等条件都极大地影响PMSG的提取效果。试验二以妊娠40天～120天的健康母马血清为材料,测定其中PMSG的效价。为确定所选马匹真实的妊娠日龄,首先核对配种纪录进行核对,随后对其血样进行生物学测定（大鼠注射）确定效价水平。实验结果显示:1)个体孕马血清中所含PMSG的效价水平存在个体差异（50～100IU/ml血清）;2)个体孕马血清中PMSG的效价水平随妊娠日龄增长而存在消长规律,母马妊娠45天开始可以从其血浆中测出含有PMSG, 60天～90天时其浓度在血中达到峰值,90天之后PMSG水平开始滑落,直至消失;试验三对孕马混合血浆工艺提取后所得透析液进行效价测定,其效价范围为1700IU/ml～2800IU/ml,本实验仅从一匹孕马（妊娠66天）的子宫中提取得到的PMSG效价即为2800IU/ml,由此可见该试验既拓宽了PMSG提取原料的选择范围,另一方面若将其工业化生产也将产生可观的经济效益。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英文对照一览表
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 孕马血清促性腺激素的研究背景
• 1.1 PMSG 生产的现状及用途
• 2 PMSG 的作用机理
• 3 PMSG 的提取纯化的研究进展
• 3.1 国外的研究进展
• 3.2 国内的研究进展
• 4 蛋白质的分离纯化概述
• 4.1 蛋白质分离纯化的特点
• 4.2 蛋白质分离纯化的基本过程
• 4.3 实现蛋白质产品的分离纯化应解决的问题
• 4.4 分离纯化蛋白质的传统方法
• 4.5 使用HPLC 分离纯化蛋白质
• 4.6 反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离蛋白质
• 第二章 试验研究
• 试验一 孕马子宫黏膜提取PMSG
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 仪器设备
• 1.3 试剂
• 1.4 配制试剂
• 1.5 试验方法及步骤
• 2 试验结果
• 2.1 孕马子宫粘膜透析液测定效价情况
• 2.2 生物学测定—注射大鼠
• 2.3 计算效价
• 3 试验讨论
• 3.1 组织提取PMSG 的提取工艺讨论
• 3.2 由子宫采集PMSG 的组织学依据
• 4 试验展望
• 试验二：测定个体孕马血清中PMSG 的效价并验证PMSG 水平消长规律
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 仪器设备
• 1.3 试验试剂
• 1.4 试验方法及步骤
• 2 试验结果
• 2.1 估计样品效价
• 2.2 注射大鼠
• 2.3 小结
• 试验三：测定混合孕马血浆中PMSG 的效价及PMSG 提纯后透析液的效价
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 仪器设备
• 1.3 试剂
• 1.4 配制试剂
• 1.5 试验方法及步骤
• 2 试验结果
• 2.1 批号为200702 混合血浆工艺提取后透析液的测定效价情况
• 2.2 批号为200704 混合血浆工艺提取后透析液的测定效价情况
• 2.3 批号为200707 混合血浆工艺提取后透析液的测定效价情况
• 2.4 小结
• 3 讨论
• 3.1 提取纯化工艺中应注意的问题
• 参考文献
• 附表
• 附图
• 致谢
• 导师评阅表