低温选择大黄鱼子代SSR分析及越冬季节生理生化指标变化

论文摘要

大黄鱼耐低温问题一直受到普遍关注,特别是近年来我国海区冬季常受寒潮侵袭,加上养殖大黄鱼（Pseudosciaena crocea）种质退化等原因,使养殖大黄鱼越冬损失惨重。2007年1月,课题组在浙江舟山水产所基地进行了大黄鱼低温选育工作,在室内水泥池中加冰降温,从920尾岱衢族大黄鱼中选择出225尾能耐受5.5℃低温的大黄鱼,通过自交繁育得到低温选择子一代,再以同样的方式选育出低温选择子二代。本文通过对低温选择子代及对照组大黄鱼进行SSR分析及越冬季节大黄鱼生理生化（抗氧化系统、血清生化指标、脂肪酸组成）变化分析,以期为低温选育大黄鱼进行评价,并为大黄鱼抗寒机理研究提供理论依据。对低温选择大黄鱼进行微卫星分析,结果显示,筛选出9对微卫星引物对两个低温选择子代及非低温选择对照组进行扩增,共得到46条片段。经连续两代人工选育,低温选择大黄鱼仍保持较高的遗传多样性,多态信息含量分别为0.5303、0.5165,均大于0.5,具有一定的选择潜力,可进行进一步选育,但应给予保护,防止遗传多样性的丢失,品种退化。发现LYC0015112、LYC0015102在低温选择组及对照组中出现频率差异很大（LYC0015112:低温选择子一代28.6%,低温选择子二代10%,非低温选择组80%;LYC0015102:低温选择子一代57.1%,低温选择子二代35%,非低温选择组中未检出）。表明该等位基因对大黄鱼的温度敏感特性有较明显的偏好性,可能与某种耐低温基因存在一定的连锁关系。通过对越冬季节不同温度下采集大黄鱼样品分析其生理生化变化,发现越冬季节,随着温度的变化,机体会通过各种途径抵御寒冷。肝脏中的SOD随温度降低而增加, 20℃时活力仅为53.32U/mgprot, 8℃时活力增加至61.76 U/mgprot。POD及CAT在降温过程中变化不规律或变化不显著。肌肉中各种酶活力显著小于肝脏。如,肝脏中SOD活力是肌肉中的5倍,而肝脏中的CAT活力是肌肉中的10倍。且活力在降温过程中呈下降趋势或升高滞后。低温下大黄鱼抗氧化系统基本保持平衡,MDA与抗氧化酶变化趋势基本相同,说明大黄鱼有能力在越冬季节通过自身调节抵抗寒冷带来的活性氧自由基损伤。通过对血清生化指标的分析,结果表明,自然降温时,多数血清酶下降,如ALT（由20℃时22.4U/L到8℃时14.77U/L）、AST（由20℃时84.4U/L到8℃时53.27U/L）、ALP（由20℃时12.78U/L到8℃时6.31U/L）等,因血清酶活性是器官功能损伤的相关指标,故推断低温可引起大黄鱼器官的损伤。同时血清中脂类、尿素氮的变化,反映出低温影响脂类及蛋白质代谢的变化。通过对肝脏肌肉脂肪酸变化分析,低温下,机体增加不饱和脂肪酸,特别是EPA（C20:5（n-3））。肌肉中从20℃时5.71%增至8℃时8.06%。肝脏中从20℃时6.76%增至8℃时8.44%。在越冬禁食过程中,机体通过自身的脂肪酸动态转化和代谢,减少饱和脂肪酸含量,而增加不饱和脂肪酸含量,以此增加膜的流动性,抵御寒冷。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 文献综述
• 1 基于SSR技术的鱼类遗传多样性及形状相关分子标记的研究进展
• 1.1 微卫星在鱼类遗传多样性的研究进展
• 1.2 微卫星在性状相关分子标记的研究进展
• 2 温度变化对鱼类部分生理生化指标影响的研究进展
• 2.1 温度变化影响氧化还原系统指标的研究进展
• 2.2 温度变化影响血清生化指标变化的研究进展
• 2.3 温度变化影响脂肪酸组成及含量变化的研究进展
• 第二章 低温选择大黄鱼SSR分析
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 基因组DNA 的提取质量
• 2.2 群体遗传多态性分析
• 2.3 遗传距离分析
• 2.4 耐低温性状相关微卫星标记的筛选
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 越冬季节大黄鱼抗氧化系统指标的变化
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 越冬季节总蛋白含量变化
• 2.2 越冬季节抗氧化酶活力变化
• 2.3 越冬季节GSH 含量变化
• 2.4 越冬季节MDA 含量变化
• 2.5 越冬季节T-AOC 活力变化
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 越冬季节大黄鱼血清生化指标变化
• 1 材料与方法
• 1.1 采样
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 越冬季节血清酶活性的变化
• 2.2 越冬季节血清血脂浓度、脂蛋白、尿素氮的变化
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 越冬季节大黄鱼脂肪酸组成及含量变化
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 前处理
• 1.2.2 GC-MS 参数设计
• 1.2.3 脂肪酸的定性与定量
• 1.2.4 数据处理
• 2 结果
• 2.1 越冬季节大黄鱼肌肉脂肪酸组成变化
• 2.2 越冬季节大黄鱼肝脏脂肪酸组成变化
• 3 讨论
• 4 小结
• 第六章 结论
• 1 结论
• 2 创新点
• 3 研究设想
• 参考文献
• 在学研究成果
• 致谢