玉屏风多糖对PDGF诱导的大鼠HSC的增殖及ERK1/2传导通路的影响

论文摘要

目的:观察玉屏风多糖（YPF-P）对血小板衍生生长因子-BB（platelet derivegrowth factor-BB PDGF-BB）刺激大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell HSC）增殖、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、PDGF-BB、PDGFR-β、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（Phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2,P-ERK1/2）与c-fos、c-jun表达的影响,探讨YPF-P抗肝纤维化的分子机制。方法:1.MTT法观察不同质量浓度YPF-P在不同时间对PDGF诱导的HSC-T6细胞增生的影响,筛选出YPF-P的最佳作用时间及浓度;2.RT-PCR法观察YPF-P对PDGF诱导的HSC-T6细胞的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA mRNA表达的影响;3. RT-PCR法观察YPF-P对PDGF诱导的HSC-T6细胞的PDGF-BB、PDGFR-βmRNA表达的影响;4. Western blot测定YPF-P对PDGF-BB诱导的HSC-T6细胞的ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达影响;5. RT-PCR法观察YPF-P对PDGF诱导的HSC-T6细胞的c-fos与c-jun mRNA表达的影响。结果:1.YPF-P对PDGF诱导的HSC-T6增殖作用的影响外源性刺激因子PDGF-BB（10ng/ml）刺激的模型组与不加外源性刺激因子的正常对照组比较HSC-T6在24h处基本无变化,差异无统计学意义。而在48、72h处增殖明显,差异有统计学意义,其中以48h增值最为明显;12.5、25、50、100、200mg/L的YPF-P作用组与PDGF-BB刺激组比较均能抑制PDGF-BB诱导的HSC增殖,随YPF-P作用浓度增加抑制作用增强,其中除12.5mg/L的YPF-P对HSC的抑制作用不明显外,其余剂量组均较明显。2. YPF-P对PDGF诱导的HSC-T6细胞Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-SMA mRNA表达的影响在正常对照组,HSC-T6细胞Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-SMA mRNA表达呈相对低水平;而模型组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-SMA mRNA表达明显高于正常组（P <0.01）; 25,50,100mg/L的YPF-P组均能明显抑制升高的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-SMA mRNA水平,且随YPF-P浓度的增加抑制作用增强。3. YPF-P对PDGF诱导的HSC-T6细胞PDGF-BB和PDGFR-βmRNA表达的影响在正常对照组,HSC-T6细胞PDGF-BB和PDGFR-βmRNA表达呈相对低水平;而模型组PDGF-BB和PDGFR-βmRNA表达明显高于正常组（P <0.01）; 25,50,100mg/L的YPF-P组均能明显抑制升高的PDGF-BB和PDGFR-βmRNA水平,且随YPF-P浓度的增加抑制作用增强。4. YPF-P对PDGF诱导的HSC - T6细胞ERK1/2及磷酸化的ERK1/2蛋白的表达的影响PDGF诱导的HSC-T6细胞磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）表达较正常对照组明显增强, ERK通路阻断剂U0126和YPF-P可降低PDGF诱导的HSC-T6细胞p-ERK1/2的蛋白表达,U0126和YPF-P联合使用作用更加明显。5. YPF-P对PDGF诱导的HSC-T6细胞c-fos与c-jun mRNA表达的影响在空白对照组,HSC-T6细胞c-fos与c-jun mRNA表达呈相对低水平;而模型组c-fos与c-jun mRNA表达明显高于正常组（P <0.01）; 25,50,100mg/L的YPF-P组均能明显抑制升高的c-fos与c-jun mRNA水平,且随YPF-P浓度的增加抑制作用增强。结论:YPF-P可抑制PDGF-BB诱导的大鼠HSC增殖,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-SMA mRNA表达,其机制可能与抑制PDGF-BB、PDGFR-β表达,进而抑制其诱导ERK1/2信号通路有关,这可能是该药抑制肝星状细胞增生的作用机制之一。

论文目录

• 英文缩略词
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 玉屏风多糖对PDGF 诱导的大鼠HSC 的增殖及Ⅰ型胶原Ⅲ型胶原和α-SMA 表达的影响
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 玉屏风多糖对PDGF 诱导的HSC 的PDGF-BB 及PDGFR-β的表达及其诱导的ERK 通路的影响
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 参考文献
• 结论
• 附录 个人简历
• 致谢
• 综述
• 参考文献