南方红豆杉含药血清抑制人肺癌A549细胞的增殖及对MAPK信号通路抑制作用的实验研究

论文摘要

目的研究南方红豆杉含药血清对人肺癌A549细胞增殖的影响及其对促分裂素原活化蛋白激酶（Mitogen-activated Protein Kinase,MAPK）通路的作用。方法纯种新西兰家兔8只,体重约2kg,随机分成4组,根据人和动物体表面积折算的等计量比率表,分为生理盐水组,低剂量南方红豆杉组（186.65mg/kg/d）,中剂量南方红豆杉组（373.3mg/kg/d）,高剂量南方红豆杉组（746.6mg/kg/d）,连续灌胃7天,末次灌胃后1小时后,清醒状态下无菌心脏采血,分离血清,同组兔血清混合,过滤除菌,-20℃保存备用。分别用10%生理盐水血清组、10%低剂量南方红豆杉含药血清组、10%中剂量南方红豆杉含药血清组、10%高剂量南方红豆杉含药血清组作用人肺癌A549细胞24h后光镜下观察细胞形态并拍照,以MTT法检测各组OD值,计算抑制率。Western-blot检测细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（P-ERK1/2）、p38、磷酸化 p38（P-p38）、JNK、磷酸化 JNK（P-JNK）蛋白表达,Real-time PCR方法测定细胞中ERK1、JNK、p38mRNA表达水平。各组间差别的单因素方差分析用SPSS17.0软件处理。结果南方红豆杉含药血清各剂量组均有明显的抑瘤效果,MTT检测低、中、高红豆杉含药血清组抑瘤率分别为19.73%、32.46%、42.23%,各组与生理盐水血清组差异均具有统计学意义。Western blot检测不同浓度的含药血清作用于人肺癌A549细胞后南方红豆杉含药血清组P-p38的表达水平较生理盐水血清组明显增加,P-ERK1/2和P-JNK表达较生理盐水血清组明显下降。对p38、ERK1/2和JNK的表达无明显影响。Real-time PCR测定不同浓度的含药血清作用于人肺癌A549细胞后南方红豆杉含药血清组较生理盐水血清组ERK1、JNKmRNA表达明显降低（P<0.05）,p38mRNA表达明显升高（P<0.05）。结论实验结果表明,南方红豆杉含药血清可能通过抑制MAPK信号通路而起到抑制人肺癌A549细胞增殖的效果。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 一、材料与方法
• （一） 实验材料
• 1. 实验室
• 2. 实验细胞、实验动物
• 3. 实验器材
• 4. 实验仪器
• 5. 实验药品及制备
• 6. 实验试剂
• 7. 主要试剂的配置
• （二） 实验方法
• 1. 人肺癌A549细胞的复苏、冻存、计数、培养与传代
• 2. 分组给药
• 3. 细胞形态学观察
• 4. MTT法检测南方红豆杉含药血清对人肺癌A549细胞增殖的影响
• 5. Western blot检测
• 6. Real-time PCR法检测
• 7. 统计学处理
• 二、结果
• （一） 南方红豆杉含药血清对人肺癌A549细胞形态的影响
• （二） 南方红豆杉含药血清对人肺癌A549细胞增殖的影响
• （三） 南方红豆杉含药血清对人肺癌A549细胞ERK1/2等蛋白表达的影响
• （四） 南方红豆杉含药血清对人肺癌A549细胞p38等mRNA表达的影响
• 三、分析与讨论
• （一） 抗肿瘤靶点研究热点
• （二） 中药抗肿瘤热点研究现状
• 1. 诱导肿瘤细胞凋亡
• 2. 抑制肿瘤血管生成
• 3. 增强机体自身免疫力
• 4. 逆转癌细胞的多重耐药
• （三） 南方红豆杉研究现状
• （四） 南方红豆杉含药血清抑制人肺癌A549细胞增殖机制的探讨
• 1. 南方红豆杉含药血清的制备及其对人肺癌A549细胞增殖抑制的讨论
• 2. 细胞形态学变化
• 3. 南方红豆杉水提物对MAPK信号通路的影响
• （五） 工作展望
• 四、小结
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 文献综述
• 参考文献