“清洁”载体转化系统的建立与应用

“清洁”载体转化系统的建立与应用

论文摘要

小麦(Triticum aestivum L.)是世界上最重要的农作物之一,成为遗传工程改造农艺性状的主要研究对象。遗传操作研究者一直致力于通过人工遗传操作获得稳定表达的具有优良遗传性状的转基因后代,并消除其生物安全性的潜在危险。基因枪介导转化方法成为小麦遗传工程中的主导手段,传统的基因枪遗传转化法是用完整的环形质粒直接轰击受体材料获得稳定遗传后代,其中质粒中的细菌载体框架序列不仅是多余的且可能通过同源重组导致目的基因在转基因后代中不稳定的遗传。本研究通过基因枪法直接将多个目的基因最小表达框同时插入不同基因型小麦基因组中,获得稳定遗传的转基因小麦植株。建立并优化了“清洁”载体转化系统,剔除了细菌载体框架序列,并将此技术用于重要农艺性状基因的转化。首先,通过标记基因(gus)和选择基因(bar)的遗传转化建立优化“清洁”载体转化系统,分别将完整的环形质粒和无载体框架序列的线性基因表达框(启动子,开放阅读框及终止子)两种构型导入可再生的幼胚组织并获得稳定表达的转基因植株。相对于完整质粒,线性基因表达框进行的转化效率约高出一倍,Southern-blot分析均呈现出1-3条外源基因的杂交带,表现出相对简单的遗传整合方式。转基因表达分析表明基因表达框在转基因后代中稳定表达,并遵循孟德尔遗传法则进行遗传分离。然后,通过优化“清洁”载体转化系统的各项转化参数,有效地提高了遗传转化效率,研究表明线性基因同样有效地将多种不同的基因整合插入受体基因组;最后,将该“清洁”转化系统分别运用于两种高分子量麦谷蛋白亚基基因1Ax1和1Dx5的遗传转化,以多种不同基因型小麦受体获得稳定表达及低拷贝的转基因植株,提高其胚乳组织麦谷蛋白亚基含量,有效改善其面包品质,并为其市场化降低了潜在的安全隐患。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 1 绪论
  • 1.1 转基因植物生物安全性与转化单元的关系
  • 1.2 转基因植物生物安全性的研究现状
  • 1.3 转基因小麦的研究进展
  • 1.4 本文研究内容
  • 2 小麦“清洁”载体转化系统的建立
  • 2.1 绪言
  • 2.2 实验材料
  • 2.3 实验方法
  • 2.4 实验结果
  • 2.5 讨论
  • 2.6 本章小结
  • 3 小麦HMW-GS 基因1AX1 的“清洁”载体遗传操作
  • 3.1 绪言
  • 3.2 实验材料
  • 3.3 实验方法
  • 3.4 实验结果
  • 3.5 讨论
  • 3.6 本章小结
  • 4 小麦HMW-GS 基因1DX5 的“清洁”载体遗传操作
  • 4.1 绪言
  • 4.2 实验材料
  • 4.3 实验方法
  • 4.4 实验结果
  • 4.5 讨论
  • 4.6 本章小结
  • 5 全文总结
  • 5.1 主要研究结果
  • 5.2 本文的特色与创新
  • 5.3 有待继续开展的工作
  • 致谢
  • 附录1 攻读学位期间发表的论文目录
  • 附录2 主要符号与缩略词表
  • 相关论文文献

    • [1].多种载体无障碍转化 寻求缩微工作新出路——东锅缩微工作实现成功转型[J]. 数字与缩微影像 2008(02)
    • [2].可用于植物转化的RNAi载体构建方法[J]. 安徽农业大学学报 2012(01)
    • [3].鱼用现代疫苗的研究进展(下)[J]. 渔业致富指南 2009(24)
    • [4].人文医院建设与医院文化[J]. 中国医学人文 2016(06)
    • [5].双价表达载体转化辣椒的体系优化[J]. 广东农业科学 2014(13)
    • [6].柚CCoAOMT基因的克隆与超表达载体构建[J]. 中国农学通报 2014(25)
    • [7].第一类整合酶表达载体的构建及鉴定[J]. 现代食品科技 2008(01)
    • [8].尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)cyp19a1a原核表达与蛋白纯化[J]. 渔业科学进展 2014(04)
    • [9].农杆菌介导的ACO基因RNAi载体转化百合抗衰老研究[J]. 干旱地区农业研究 2012(02)
    • [10].酱油工业生产菌沪酿3042基因工程转化体系的构建[J]. 食品工业科技 2009(06)
    • [11].CmsCRC与佛手指状结构的伸展相关并受低温激活[J]. 园艺学报 2019(11)
    • [12].WprA基因在Bacillus subtilis WB800中的克隆表达[J]. 现代食品科技 2012(08)
    • [13].牛肠激酶轻链基因的构建与原核表达[J]. 辽宁大学学报(自然科学版) 2012(01)
    • [14].东亚三角涡虫innexin基因干扰载体的构建[J]. 山东理工大学学报(自然科学版) 2010(05)
    • [15].利用CRISPR-Cas9基因组编辑技术定向敲除烟草eIF4E-6基因[J]. 分子植物育种 2017(02)
    • [16].科技文摘[J]. 中国园艺文摘 2012(04)
    • [17].载体浓度和感受态对大分子载体转化效率的影响[J]. 安徽农业科学 2016(17)
    • [18].提高小麦基因枪法转化效率的研究[J]. 麦类作物学报 2015(04)
    • [19].木薯细菌性枯萎病菌hrpG基因突变体的获得[J]. 热带作物学报 2013(06)
    • [20].玉米大斑病菌原生质体遗传转化体系的建立[J]. 玉米科学 2011(04)
    • [21].斑马鱼干扰素γ的克隆表达研究[J]. 现代生物医学进展 2009(13)
    • [22].果树遗传转化方法概述[J]. 落叶果树 2014(01)
    • [23].浅析手绘设计草图对产品设计师的必要性[J]. 改革与开放 2010(16)
    • [24].利用DNA重组技术生产L-苯丙氨酸的研究[J]. 天津农学院学报 2020(02)
    • [25].产白藜芦醇大肠杆菌基因工程菌的构建[J]. 食品工业科技 2013(23)
    • [26].酵母双杂交筛选PMEPA1互作蛋白[J]. 华南师范大学学报(自然科学版) 2012(04)

    标签:;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  

    “清洁”载体转化系统的建立与应用
    下载Doc文档

    猜你喜欢