论文题目: Baytril对BHK-21细胞大肠杆菌、猪鼻支原体污染清除研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 草业科学
作者: 高林
导师: 孙吉雄,王旭东,张念祖
关键词: 细胞培养,细菌,支原体,清除污染
文献来源: 甘肃农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 细胞培养中的细菌和支原体污染,特别是支原体污染一直都是细胞培养的难题。污染了细菌和支原体的细胞,虽然一般选择废弃,但有些重要的细胞依然需要靠清除污染来挽救。鉴于细胞培养的污染清除中存在的诸多问题,本研究以BHK-21细胞、抗菌药Baytril、大肠杆菌、猪鼻支原体为研究对象,用96孔细胞培养板,采用10倍分级稀释法,测出抗菌药Baytril对BHK-21细胞的最小抑制浓度为60-80PPM。用同样方法,测出Baytril对大肠杆菌的最小抑菌浓度是1PPM。而Baytril对猪鼻支原体的最小抑菌浓度是0.5-2PPM[63],所以选定了10PPM这个即不影响BHK-21细胞,又可以抑制大肠杆菌和猪鼻支原体的Baytril浓度来做进一步的实验。在细菌部分的实验里,用含10PPM的抗菌药Baytril的MEM生长液,对用大肠杆菌人工污染的BHK-21细胞里,通过洗涮、冲洗、重点冲洗、刮出、消化、贴壁后再冲洗等循环往复的处理等办法。在抗菌药Baytril的保护下,大幅度地稀释大肠杆菌在细胞群里面的浓度,同时也在用无抗菌药的培养液做大肠杆菌的监测。监测显示,进行到第4个清污循环时,BHK-21细胞里大肠杆菌的污染已经被彻底清除。在支原体的的实验里,人为感染猪鼻支原体的BHK-21细胞,同样是用含10PPMBaytril抗生素的MEM生长液,同样采用和清除大肠杆菌基本相同的方法。用DNA荧光染色法和PCR法对猪鼻支原体的清除进行不断监测,结果发现,同样是到了第4轮循环,BHK-21细胞就脱离了支原体的污染,并且PCR法比起DNA荧光染色法要敏感得多。最后通过生物统计学里的配对资料符号检验法检验后得出,本方法对清除BHK-21细胞系中的大肠杆菌、猪鼻支原体感染具有极显著的效果。
论文目录:
摘要
Summary
第一部分 综述
组织细胞培养中的污染及控制
1.污染的概念
2.污染的种类和防制
2.1 物理污染
2.2 化学污染
2.3 交叉污染
2.4 微生物污染
3.微生物污染
3.1 微生物污染的判断
3.2 微生物污染的预防
3.3 微生物污染的清除
4.展望
第二部分 研究论文
Baytril对BHK-21细胞大肠杆菌、猪鼻支原体污染清除研究
前言
1.材料
1.1 实验对象
1.2 主要实验材料
1.3 主要试剂及其配制
1.4 主要实验仪器设备
2.实验方法
2.1 细菌部分
2.2 支原体部分
3.结果及分析
3.1 大肠杆菌菌种复舒结果
3.2 测定Baytril对大肠杆菌的抑制浓度结果
3.3 测定Baytril对BHK-21细胞的抑制浓度结果
3.4 对3.2和3.3两个实验结果的综合分析
3.5 Baytril对大肠杆菌污染的清除结果
3.6 Baytril对猪鼻支原体污染的清除结果
4.讨论
4.1 关于实验对象的选择
4.2 关于对大肠杆菌和猪鼻支原体污染的清除循环差异
4.3 关于对支原体活性的检测
4.4 关于冲洗在污染清除中的作用
4.5 关于对猪鼻支原体的检测
4.6 关于DNA染色法对支原体的检测
4.7 关于对支原体DNA的提取
4.8 关于再传3代的意义
4.9 关于DNA荧光染液pH值
4.10 关于抗菌药法和抗生素(抗菌素)法
4.11 关于Baytril的抑菌机理
5.0 结论
致谢
参考文献
作者简介
发布时间: 2008-08-11
参考文献
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