论文摘要
人白细胞介素-4（human interleukin-4,hIL-4）是由129个氨基酸组成的多肽,具有广泛的生理作用。 在本实验中,首先采用RT-PCR法从经LPS诱导刺激的人外周血淋巴细胞中克隆了hIL-4基因。为了高效表达hIL-4,本研究采用了家蚕杆状病毒表达系统（Bombyx moribaculovirus expression vector system,BMBEVS）。将460bp的目的基因插入家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,构建成重组载体pBacPAK-hlL-4,与线性化病毒Bm-BacPAK6共转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒BacPAK-hIL-4。PCR结果表明重组病毒基因组中含有目的基因。重组病毒以MOI=10感染家蚕细胞（2×106个细胞/瓶）、家蚕5龄幼虫和蚕蛹。表达产物经SDS-PAGE、ELISA方法进行检测。用人外周血T淋巴细胞测定表达产物体外生物活性。SDS-PAGE检测发现在20kD的位置有个特异条带。ELISA检测表明产物具有较强免疫原性。T淋巴细胞测活表明,感染BacPAK-hIL-4病毒后96h的幼蚕蚕血淋巴表达产物对经PHA活化的T淋巴细胞增殖具有促进作用。
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标签：克隆论文; 表达论文; 家蚕杆状病毒表达载体系统论文; 反应器论文;