有机相酶法合成帕罗西汀手性中间体的研究

论文摘要

本论文目的是利用脂肪酶催化不对称转酯化反应拆分外消旋帕罗西汀中间体,从而获得光学纯帕罗西汀中间体。论文建立了帕罗西汀中间体液相色谱分析方法,得到液相色谱检测的工作曲线Y=52894.7X-26242.1,相关系数R2=0.9998。实验建立了手性正相液相色谱分析方法,用于检测帕罗西汀中间体的对映体过量值。本论文利用荧光检测技术以帕罗西汀中间体为底物,乙烯乙酸酯为酰基供体,建立脂肪酶酯化活性的高通量筛选模型。实验以485nm为荧光激发波长,538nm为荧光吸收波长,建立了脂肪酶筛选模型的工作曲线Y=10685X+176.15,相关系数R2=0.9972。结合手性正相液相色谱仪法分析酶催化反应的底物对映体过量值,得出Novozym435对帕罗西汀中间体具有较高的酯化活性和立体选择性。本论文对Novozym435在有机相中催化拆分外消旋帕罗西汀中间体反应的影响因素进行了研究。研究表明其最佳转化条件为：反应溶剂二氯甲烷,酰化剂乙烯乙酸酯,反应温度30℃,底物浓度200mM,摇床转速200r/min,底物与酰化剂的摩尔比例为1：1,反应时间12h。在该酶催化反应条件下,反应转化率为54.0%,底物对映体过量值为96.3%,E值为40.0。Novozym435重复使用8批次,酶活性和立体选择性保持基本稳定。本论文的酶催化反应研究为将来酶法合成手性帕罗西汀的工业化应用打下了基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 文献综述
• 1.1 引言
• 1.2 帕罗西汀的研究进展
• 1.2.1 帕罗西汀的合成路线
• 1.2.2 生物法制备帕罗西汀手性中间体
• 1.3 有机相脂肪酶催化研究
• 1.3.1 有机相脂肪酶催化特点
• 1.3.2 有机相脂肪酶催化的影响因素
• 1.4 课题思路
• 1.4.1 选题意义
• 1.4.2 研究思路和内容
• 第二章 帕罗西汀中间体高效液相色谱分析方法的建立
• 2.1 前言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.3 结果和讨论
• 2.3.1 帕罗西汀中间体紫外最大吸收波长的选择
• 2.3.2 帕罗西汀中间体液相色谱标准曲线
• 2.4 本章小结
• 第三章 有机相脂肪酶转酯化活性高通量筛选模型的建立
• 3.1 前言
• 3.2 材料和方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 荧光吸收波长的选择
• 3.3.2 荧光检测工作曲线
• 3.3.3 稳定性试验
• 3.3.4 干扰试验
• 3.3.5 脂肪酶高通量筛选实例
• 3.4 本章小结
• 第四章 有机相酶法拆分帕罗西汀手性中间体反应条件研究
• 4.1 前言
• 4.2 材料和方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 脂肪酶的筛选
• 4.3.2 酰化剂对Novozym 435催化反应的影响
• 4.3.3 反应溶剂对Novozym 435催化反应的影响
• 4.3.4 酶浓度对酶反应初速度的影响
• 4.3.5 摇床转速对Novozym 435催化反应的影响
• 4.3.6 反应温度对Novozym 35催化反应的影响
• 4.3.7 底物浓度对Novozym 435催化反应的影响
• 4.3.8 底物酰化剂摩尔比对Novozym 435催化反应的影响
• 4.3.9 Novozym 435催化反应的时间曲线
• 4.3.10 Novozym 435的重复利用
• 4.3.11 酶反应后的帕罗西汀中间体比旋光值测定
• 4.4 本章小结
• 第五章 结论与建议
• 5.1 总结
• 5.2 建议
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录