论文摘要
阴道毛滴虫病是一种性传播疾病,据估计,全世界感染者达 1.7亿人之多。自从二十世纪六十年代以来,甲硝唑一直是治疗阴道毛滴虫病的首选药物,直到今天,此药对 90%～95%的感染者仍然有效。然而,逐渐增多的耐甲硝唑的阴道毛滴虫使甲硝唑作用浓度增加且不能治愈所有的患者。除此之外,由甲硝唑产生的致畸、恶心、胃肠不适以及过敏反应等副作用使某些患者不适于服用此药。 近来有报道替硝唑能有效地杀灭耐甲硝唑的阴道毛滴虫分离株,其最小致死浓度低于甲硝唑。有许多中药如苦参、黄柏和黄连等已经用于临床治疗阴道毛滴虫病,但疗效不及甲硝唑。 在药物筛选试验中一般采用体外培养的虫体。阴道毛滴虫在胱胨肝麦芽糖培养基、酪蛋白胰酶水解物-酵母提取物-麦芽糖培养基、改良肝浸汤培养基等培养基中都能很好地生长,而一种广泛用于各种细胞培养 RPMI-1640 培养基,也能用来培养阴道毛滴虫。 合适的培养基和准确地计数对于评价药物抗阴道毛滴虫的效果是非常必要的,常用的计数虫体数目的方法有血球计数板法和 MTT 法。 本研究拟通过筛选的适宜阴道毛滴虫生长的恰当培养基和较准确的计数方法来评价复方 MSSZ（由甲硝唑、苦参、千里光和莪术油按比例组成的混和物）体外抗阴道毛滴虫的作用。 方法:从肝浸汤培养基和 RPMI-1640 培养基中筛选出适宜培养阴重庆医科大学硕士研究生学位论文3道毛滴虫的培养基;比较 MTT 法和血球计数板法两种计数方法,以准确检测体外培养的虫体增殖情况,并以透射电镜观察正常生长的虫体超微结构形态;运用筛选出的培养基作为基础培养基,以甲硝唑、苦参提取物、莪术提取物、千里光提取物作为阳性对照,空白培养液及 1%乙醇作为阴性对照,用复方 MSSZ（甲硝唑、苦参、千里光、莪术提取物的混合物）及简单复方（由甲硝唑、苦参等单药以相同比例两两混合组成 6 种配伍）处理体外培养的阴道毛滴虫,检测上述药物对阴道毛滴虫增殖的影响,从而评价复方 MSSZ 的疗效,并以透射电镜观察经药物处理后的虫体超微结构改变情况。结果:在 37℃、pH5.8 的条件下,接种在 RPMI-1640 培养基里的阴道毛滴虫在 48h 时达到增殖高峰,增殖倍数为 13.6 倍,可满足药物实验所需大量虫体的要求;RPMI-1640 培养基培养基的配制过程简单规范,所培养的虫体涂片在观察视野内清晰。接种在肝浸汤培养液中的阴道毛滴虫,在 72h 时达增殖高峰,增殖倍数为 26.4 倍,但其培养物涂片在观察视野内呈现死亡肝细胞与阴道毛滴虫混杂现象,死亡肝细胞遮盖部分虫体。在光镜下观察到不是所有的活虫体都能被 MTT 染色。药物杀虫实验结果显示,复方 MSSZ 与甲硝唑组、莪术油组、千里光、苦参提取物组和阴性对照组（RPMI-1640 培养液和 1%乙醇）相比有显著差别。复方 MSSZ 1:1 稀释浓度组在 2h 时对阴道毛滴虫的平均杀虫率为 94.44%,在 6h 时即可杀死全部阴道毛滴虫;1:2 稀释浓度组在 12h 时杀灭全部阴道毛滴虫;1:4 和 1:8 稀释浓度组在 24h 时则可将阴道毛滴虫杀死;1:16 稀释浓度在 24h 时对阴道毛滴虫生长仅有抑制作用。复方 MSSZ 体外杀灭阴道毛滴虫的最小致死浓度（MLCs）为1:8 稀释浓度。甲硝唑 1:1 稀释浓度组在 2h 时对阴道毛滴虫的平均杀虫率为重庆医科大学硕士研究生学位论文487.04%,在 6h 时杀灭全部阴道毛滴虫;1:2 稀释浓度组在 12h 时杀灭全部阴道毛滴虫;1:4 稀释浓度组 24h 时可达到达到 100%的杀虫效应。甲硝唑体外杀灭阴道毛滴虫的最小致死浓度（MLCs）为 1:4 稀释浓度。苦参 1:1 稀释浓度组在 2h 时对阴道毛滴虫的平均杀虫率为75.93%,12h 时杀灭全部阴道毛滴虫;1:2 稀释浓度组苦参在 24h 时杀灭全部阴道毛滴虫,1:4、1:8、1:16 稀释浓度苦参在 24h 时均对阴道毛滴虫的生长有抑制作用。苦参体外杀灭阴道毛滴虫的最小致死浓度（MLCs）为 1:2 稀释浓度。千里光 1:1 稀释浓度组在 24h 时对阴道毛滴虫的平均杀虫率为94.85%,各浓度在 24h 时仅有抑虫效应。莪术油 1:1 稀释浓度组在 24h 时杀灭全部阴道毛滴虫,低浓度度组（1:2 、1:4、1:8、1:16 稀释浓度）在 24h 时对阴道毛滴虫有抑制作用。莪术油体外杀灭阴道毛滴虫的最小致死浓度（MLCs）为 1:1 稀释浓度。体外实验研究表明,各种药物作用阴道毛滴虫的效应呈浓度、时间依赖关系。苦参、千里光和莪术对阴道毛滴虫的作用较缓慢,1:1 稀释浓度至少需要 12h 才能杀灭全部阴道毛滴虫,实验结果与有关文献报道相符。复方 MSSZ 与甲硝唑对阴道毛滴虫的杀虫效应曲线趋势相似,1:1 稀释浓度在 2h 时可迅速杀灭阴道毛滴虫。但在各观察时段、各浓度组的杀虫效应明显高于相应浓度的单药甲硝唑、千里光、莪术和苦参。从 1:8 稀释浓度的复方 MSSZ 与简单复方 MS1、MS2、MZ、S1S2、S1Z、S2Z 体外对阴道毛滴虫的实验结果看,复方 MSSZ 有较好的杀虫效果,杀虫作用较快且作用强,在各观察时刻的平均杀虫率均高于由相应稀释度各组份两两混合而成的简单复合物。各简单复方对阴道毛滴虫的体外作用也不相同,其配伍中含有甲硝唑的简单复方的