北京地区肉鸡场沙门氏菌的流行性、耐药性及分子分型研究

论文摘要

沙门氏菌是全球范围内最重要的食源性病原菌之一,鸡是其主要的感染来源,肉鸡养殖场作为感染源头,研究其流行性、耐药性及分子分型对于肉鸡养殖业及公共卫生都具有重要意义。沙门氏菌的血清型达2500种以上,不同国家、不同地区乃至不同养殖场其沙门氏菌的流行情况也不同,本研究对北京地区肉鸡场沙门氏菌的流行情况及其耐药性和分子分型情况进行了初步的研究。针对目前沙门氏菌分离鉴定方法多种多样及分离效果不一的问题,本研究首先采用不同血清型的沙门氏菌对各种选择性增菌液和选择性培养基的组合进行了筛选和比较,并选出了最适合进行鸡源沙门氏菌分离的组合方法。根据北京地区肉鸡养殖场的分布情况,本研究共从北京地区的19个肉鸡场及屠宰场采集了1231份鸡泄殖腔、卵黄囊及环境样品,采用已经确定的方法共分离鉴定出沙门氏菌106株。血清分型结果表明：不同养殖场沙门氏菌的流行性存在显著差异（P<0.05）；所分离的沙门氏菌以肠炎沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌为主；不同养殖场所分离的沙门氏菌的血清型不一,但是同一养殖场中的优势血清型沙门菌一般在1-2种；肉仔鸡卵黄囊分离株主要以肠炎和鸡伤寒沙门菌为主,肉鸡分离株沙门菌则以肠炎和爪哇安纳沙门菌为主。采用微量肉汤稀释法对本试验分离的106株沙门菌的耐药性进行了分析,并根据其耐药情况进一步对其相应耐药基因的携带情况进行了研究。结果显示,本试验中的沙门菌分离株对多粘菌素E和大观霉素的耐药率最高,分别为88.68%和82.08%,对其余抗生素的耐药率均低于20%,其中对阿莫西林／克拉维酸最为敏感,敏感率达100%。不同血清型的沙门氏菌对抗生素的耐药性不同,虽然两种优势血清型沙门菌（肠炎沙门菌和鸡伤寒沙门菌）对多粘菌素E和大观霉素的耐药率均较高,但是在对恩诺沙星、磺胺异嗯唑和氨苄西林的耐药性方面存在显著差异（P<0.05）。多重耐药主要集中在对多粘菌素E和大观霉素的两重耐药方面。对大观霉素、四环素和多粘菌素E耐药的菌株用PCR方法进行了相应耐药基因的扩增,结果表明,大观霉素耐药菌株中aadA2基因的携带率较低（1.15%）,无aadAl基因；四环素耐药菌株中tet（A）和tet（M）基因的携带率分别为71.43%和14.29%,多粘菌素E耐药菌株中pmrA和pmrB基因的携带率分别为63.83%和73.40%,说明本试验中的四环素和多粘菌素E耐药沙门菌菌株的耐药以主动外排作用为主采用核糖体基因分型（ribotyping）与脉冲场凝胶电泳（PFGE）两种方法分别对本试验中分离的同一血清型沙门菌进行了基因分型研究。结果显示,两种分型方法的分型结果基本一致,而PFGE法较核糖体分型法更准确、更精细。北京地区肉鸡场中的肠炎沙门菌、爪哇安纳沙门菌和恩多洛沙门菌菌株间同源性较高,可推断该地区这3种沙门菌的流行情况比较稳定；鸡伤寒沙门氏菌和尼特拉沙门菌菌株的分子分型结果之间存在较大差异,说明了该沙门氏菌在北京地区的流行具有多样性和复杂性。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 符号说明
• 文献综述
• 1 沙门氏菌简介
• 2 沙门氏菌的流行性研究进展
• 3 沙门氏菌耐药的研究进展
• 3.1 沙门菌的耐药性研究方法
• 3.2 沙门菌的耐药情况
• 3.3 沙门菌的耐药机制
• 4 沙门氏菌分子分型方法的研究进展
• 4.1 质粒酶切图谱分析（PPA）
• 4.2 16S rRNA基因探针杂交分型（RT）
• 4.3 随机扩增多态性DNA分型（RAPD）
• 4.4 限制性片段长度多态性分型（RFLP）
• 4.5 扩增片段长度多态性分型（AFLP）
• 4.6 脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）
• 5 选题依据和意义
• 第一章 不同增菌液和培养基对鸡源沙门氏菌分离效果的比较研究
• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 结果
• 3.1 6种选择性培养基的初筛结果
• 3.2 菌落计数结果
• 3.3 选择性增菌液的筛选结果
• 3.4 不同组合的增菌效果试验结果
• 4 讨论
• 第二章 北京地区肉鸡场沙门氏菌的流行性调查
• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 结果与分析
• 4 讨论
• 第三章 北京地区沙门氏菌的耐药性及耐药基因的检测
• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 结果与分析
• 3.1 耐药率
• 3.2 多重耐药率
• 3.3 耐药基因检测的结果
• 4 讨论
• 4.1 沙门菌的耐药性
• 4.2 沙门菌的耐药机制
• 第四章 沙门氏菌的分子分型研究
• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料与试剂
• 2.2 主要仪器
• 2.3 常用试剂的配制
• 2.4 核糖体基因分型
• 2.5 脉冲场凝胶电泳的分型
• 3 结果与分析
• 3.1 核糖体基因分型结果
• 3.2 PFGE分型结果
• 4 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 研究生期间发表论文目录