论文摘要
本研究从河南省信阳市采集的健康茶树根际分离筛选得到对番茄灰霉病具有较高拮抗活性的生防细菌HL5-4。通过对峙培养、孢子萌发试验、离体实验和温室盆栽试验,确认其对番茄灰霉病的抑制活性；根据形态特征、生理生化特性、Biolog鉴定和16S rDNA序列分析,鉴定HL5-4菌株；进行单因素筛选和正交设计试验,探索HL5-4菌株的摇瓶发酵条件；以稀释平板培养法,测定HL5-4在番茄果实和叶片上的定殖密度；利用比色法,测定HL5-4对番茄体内抗病相关酶活性的影响,初步掌握该生防菌的防病机制,为番茄灰霉病的生物防治奠定基础。1.HL5-4对番茄灰霉病的抑制活性：HL5-4能显著抑制灰葡萄孢菌的菌丝生长和分生孢子萌发,对菌丝生长的抑菌带大小为15mm,对分生孢子萌发的抑制率为70.74%；在离体实验中,对番茄果实和叶片灰霉病的防治效果分别达到72.36%和59.85%,在盆栽试验中,对番茄苗期灰霉病的防治效果为62.88%；在不同浓度的防效试验中,当处理浓度为109cfu·mL-1时防治效果最好,达到62.36%；HL5-4处理次数越多防治效果越好,当处理次数为3次时防治效果最好为75.23%；预防效果比治疗效果好。2.HL5-4的鉴定：根据形态特征、生理生化特性、Biolog鉴定与16S rDNA序列同源性分析,将HL5-4鉴定为绿针假单胞菌（Pseudomonas choloeaphtis）。3.HL5-4的定殖能力：HL5-4对番茄果实和叶片均具有较好的定殖能力,在番茄果实和叶片的定殖密度为处理1d时分别达到626×104cfu·g-1和4.35×103cfu-g-1,处理7d时仍然达到2.47×104 cfu·g-1和2.90 ×103cfu·g-1。4.HL5-4对番茄叶部抗病相关酶活性的影响：HL5-4显著提高番茄叶部抗病相关酶活性,PPO、POD及PAL酶活性峰值分别提高22.57%、30.23%和20.99%.5.HL5-4的特性研究：HL5-4有较广的抑菌谱,能够抑制多种植物病原菌。平板检测HL5-4拮抗相关活性测定结果显示该菌株能产生纤维素酶、蛋白酶和嗜铁素,不能产生几丁质酶。6.HL5-4发酵条件优化：通过单因素筛选和正交试验优化HL5-4发酵条件结果,HL5-4的最佳培养条件是在28℃培养52h,转速160rpm,装液量60%,培养基初始pH值为7,最佳营养条件是其碳源、氮源和无机盐分别是甘油1.0%,蛋白胨0.1%和K2HPO4 0.7%、 KH2PO4 0.2%、MgSO4·7H2O 0.01%。