论文题目: GGNBP1和GGN2在小鼠睾丸中的表达及相互作用研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 遗传学
作者: 赵庆国
导师: 黄培堂,卢柏松
关键词: 精子生成,抗体,顶体
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: 原始生殖细胞(PGC)是成年性腺生殖细胞的始祖细胞。一种胚胎期生殖腺内PGC严重缺乏的生殖细胞缺失(germ cell-deficient,gcd)突变是外源基因插入失活FancL所致的隐性遗传性变异,导致成年雌雄鼠不育。胚胎期FANCL与原始生殖细胞增殖密切相关,成年睾丸中FANCL与几个睾丸生殖细胞特异性蛋白质相互作用可能影响精子的生成。以FANCL蛋白为诱饵蛋白,通过酵母双杂交实验发现了配子生成素基因Ggn。Ggn基因至少有10多种不同的拼接方式,预期编码GGN1、GGN2和GGN3三种蛋白。同样,通过酵母双杂交系统发现了与GGN1相互作用的配子生成素结合蛋白1(GGNBP1)。本课题旨在通过制备GGN2、GGNBP1和FANCL抗体,利用特异性抗体作为蛋白质研究的有效工具进行体内表达和相互作用研究,以探索它们在精子生成中所发挥的功能。 首先,通过克隆表达FANCL和GGNBP1蛋白以及人工合成GGN2短肽获得抗原,皮下注射免疫家兔制备多抗血清。制备抗体亲和层析柱亲和纯化抗体。 其次,利用纯化抗体通过Western blotting方法分析小鼠多种组织匀浆蛋白。首次证实小鼠体内确实存在FANCL、GGNBP1和GGN2蛋白。FANCL在小鼠组织细胞中广泛表达,而GGN2和GGNBP1则是小鼠睾丸特异性表达的蛋白质。 第三,提取小鼠多种组织细胞总RNA,Northern blotting分析表明Ggn和Ggnbp1也都是小鼠睾丸特异性转录基因。 第四,在NIH 3T3细胞中将带绿色荧光蛋白标签的EGFP-GGN1和EGFP-GGN2分别与带Myc标签的Myc-GGNBP1共表达,进行细胞免疫荧光共定位实验表明GGNBP1与GGN1和GGN2之间相互作用。采用酵母双杂交体系证实了它们之间的相互作用关系。 第五,Superdex 200分子筛凝胶层析小鼠睾丸匀浆蛋白,分段收集后经亲和纯化抗体的Western blotting分析显示FANCL、GGN2和GGNBP1蛋白共同分布在大小约230KDa的收集管内,表明小鼠睾丸细胞中FANCL、GGN2和GGNBP1共同存在于一个大约230KDa的复合物内。 最后,细胞共定位研究发现EGFP-GGN2集中分布于细胞泡状结构小体上。进
论文目录:
缩略词表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分：基因的克隆和表达以及多克隆抗体制备与亲和纯化
一、FANCL和GGNBP1基因cDNA的扩增和克隆
二、FANCL和GGNBP1重组蛋白的表达与纯化
三、GGN2蛋白C-端15肽的人工合成以及与BSA担体蛋白的化学偶联
四、FANCL、GGNBP1和GGN2兔多抗血清的制备与亲和纯化
第二部分：小鼠组织蛋白表达谱分析与相互作用研究
一、FANCL、GGN2和GGNBP1蛋白的小鼠组织表达谱研究
A、mRNA水平的小鼠组织表达谱Northern blotting分析
B、蛋白质水平的小鼠组织表达谱Western blotting分析
二、GGN2和GGNBP1蛋白相互作用研究
A、采用细胞共定位实验研究蛋白间的相互作用
B、小鼠睾丸匀浆蛋白分子筛分段收集后的Western blotting分析
C、利用酵母双杂交体系测定蛋白质间的相互作用
D、运用免疫共沉淀实验研究蛋白间的相互作用
第三部分：GGNBP1和GGN2的膜蛋白特征初步探索以及其它尝试性研究
第四部分：总结
论文部分参考文献
致谢
文献综述
博士期间发表论文
发布时间: 2005-09-05
参考文献
- [1].加热致小鼠睾丸生精障碍相关蛋白质及其功能的研究[D]. 朱叶飞.南京医科大学2006
- [2].小鼠睾丸特异性表达基因TSEG-2的功能初步研究[D]. 胡涛.华中科技大学2010
- [3].RNAi调控雄性小鼠睾丸uPA表达的研究[D]. 胡廉.华中科技大学2011
- [4].三个新的精子发生相关基因在人和小鼠睾丸中的表达特征[D]. 周永翠.汕头大学2009
- [5].精子发生相关泛素化修饰的蛋白质组学研究[D]. 郭曰帅.南京医科大学2015
- [6].高温热应激环境对雄性小鼠生殖机能影响及其分子机理的研究[D]. 赵珺.东北师范大学2010
- [7].生物信息挖掘新基因预测平台的建立与TSEG-3的克隆和功能初步研究[D]. 顾朝辉.华中科技大学2010
- [8].腮腺炎病毒诱导小鼠睾丸天然免疫反应的机制[D]. 吴晗.北京协和医学院2016
- [9].PP2A在雄性小鼠生殖系统中的功能研究[D]. 王蕴.南京医科大学2012
- [10].亲和组合分组系统的研究及在蛋白组学中应用[D]. 谭青乔.上海交通大学2009
相关论文
- [1].人睾丸发育/精子发生相关基因的研究[D]. 周作民.南京师范大学2003
- [2].人类睾丸cDNA array制备及睾丸发育/精子发生相关基因表达谱系构建[D]. 沙家豪.南京师范大学2003
- [3].人TCP11a、ZNF313基因在大肠杆菌中的蛋白表达及其在小鼠和人睾丸中的免疫组织化学分析[D]. 吴洽庆.四川大学2004
- [4].睾丸特异蛋白激酶TSSK4的基因克隆及功能初探[D]. 陈秀娟.复旦大学2005
- [5].ARHT2、RHEBL1、STK40和LDHAL基因的克隆及其功能研究[D]. 单玉喜.复旦大学2005
- [6].不育症与人精子膜蛋白ADAM基因表达、克隆和转基因细胞构建的研究[D]. 庄建平.苏州大学2005
- [7].小鼠睾丸生殖细胞凋亡及相关基因调控的研究[D]. 徐健.中国协和医科大学1999
- [8].睾丸特异表达蛋白SPAG8的性质和功能研究[D]. 陈迎春.中国协和医科大学2005
- [9].人睾丸蛋白质表达谱的构建及精子发生相关蛋白质组学研究[D]. 霍然.南京医科大学2006
- [10].加热致小鼠睾丸生精障碍相关蛋白质及其功能的研究[D]. 朱叶飞.南京医科大学2006