L.casei Zhang抗感染及免疫协同作用的研究

论文摘要

本研究用L.casei Zhang活菌液、活菌体及其代谢产物进行体外抑菌试验,再用其悬浮液饲喂小鼠后用大肠杆菌O157和K88菌株攻毒,观察发病情况,攻毒4d后取对照组和喂菌组未死亡的小鼠的肠内容物,用选择性培养基分离、纯化大肠杆菌和乳杆菌,将分离到的菌株,提取DNA、进行ERIC-PCR扩增、凝胶电泳分析,再进行L.casei Zhang对鸡胚肠细胞的粘附试验。结果表明L.casei Zhang活菌液及其代谢产物都有较强的抑菌活性,而活菌体没有抑菌活性,代谢产物热稳定性较好,能耐受115℃的高温,但抑菌活性受pH值的影响较大,随着pH值的降低抑菌活性逐渐升高,在弱酸和中性条件下失去抑菌活性,代谢产物的抑菌活性受胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响不大。在体内抗感染试验中L.casei Zhang对小鼠起到了保护作用,并且在停止饲喂L.casei Zhang的第4天,从小鼠肠道内分离到L.casei Zhang,说明所饲喂的L.casei Zhang可以在小鼠肠道内定植,由于L.casei Zhang对致病菌的拮抗作用使所攻的大肠杆菌数量下降,在饲喂组未分离到大肠杆菌O157和K88菌株。L.casei Zhang能够粘附鸡的肠细胞。本研究再用L.casei Zhang制成活菌数为2.0～3.0×1010cfu/ml的乳悬浮液（菌液）和活菌数为2.0～3.0×106cfu/ml的发酵乳,并按不同剂量灌服小白鼠。在灌服的第5、10、15、20、25、30天6个时间点用ELISA试剂盒测定小白鼠血清IgG含量和肠粘膜粘液SIgA含量,选择10、20、30天3个时间点用流式细胞仪测定小白鼠外周血T细胞CD3+、CD4+、CD8+亚群及其比值的变化。结果表明:灌服L.casei Zhang菌液及发酵乳的小白鼠血清中的IgG含量和肠粘膜粘液中SIgA含量比未饲喂乳杆菌的对照组显著或极显著提高（p<0.05,p<0.01）,并且菌液组与发酵乳组之间、各剂量组之间也有显著或极显著差异（p<0.05,p<0.01）。随着时间的延长IgG含量和SIgA含量具有上升的趋势。L.casei Zhang菌液和发酵乳灌服给小白鼠后均提高了小白鼠外周血中CD3+、CD4+、CD8+T细胞的比例,优化了T细胞CD4+/CD8+亚群的比值,数据统计处理结果显示,与未饲喂乳杆菌的对照组相比差异显著（p<0.05）或极显著（p<0.01）。说明L.casei Zhang能够增强小白鼠的体液免疫功能和细胞免疫功能。将1日龄雏鸡分两大组,以不同的剂量灌服L.casei Zhang活菌液和死菌液,两大组分别按常规免疫程序进行新城疫疫苗（IV系）滴鼻点眼免疫,禽流感病毒（H5）油乳剂灭活疫苗皮下注射免疫,在二免后的第7天和14天检测血凝抑制（HI）效价。结果表明,与未饲喂乳杆菌的对照组相比,试验各组抗体水平均提高到显著或极显著水平（p<0.05,p<0.01）。说明L.casei Zhang与新城疫疫苗和禽流感病毒（H5）油乳剂灭活疫苗有很好的免疫协同作用,能够促进雏鸡免疫功能。本研究还用L.casei Zhang肽聚糖和DNA添加到新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感病毒（H5）油乳剂灭活疫苗,制成肽聚糖佐剂和DNA佐剂新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感病毒（H5）油乳剂灭活疫苗,按常规免疫程序分别免疫雏鸡,在二免后的第7天和14天检测血凝抑制（HI）效价。结果表明,肽聚糖佐剂和DNA佐剂新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感病毒（H5）油乳剂灭活疫苗组与对照组相比,试验各组抗体水平均提高到显著或极显著水平（p<0.05,p<0.01）,说明L.casei Zhang肽聚糖和DNA具有良好的免疫增强作用,是良好的免疫佐剂。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 乳酸菌的发展史
• 1.2 乳杆菌的生物学特性
• 1.3 乳杆菌的生理功能
• 1.3.1 维持肠道菌群生态平衡
• 1.3.2 阻止致病菌对肠道的入侵和定植
• 1.3.3 增强机体免疫功能
• 1.3.4 控制内毒素
• 1.3.5 降低胆固醇调节血脂
• 1.3.6 幽门螺旋杆菌（Hp）的治疗
• 1.3.7 缓解肝硬化
• 1.3.8 预防和抑制肿瘤发生
• 1.3.9 改善过敏性变态反应
• 1.3.10 提高营养利用率、促进营养吸收
• 1.3.11 产生风味物质
• 1.3.12 缓解乳糖不耐症
• 1.3.13 改善便秘
• 1.3.14 预防衰老
• 1.3.15 抑制糖尿病发生
• 1.3.16 乳酸菌的其它功效
• 1.4 免疫系统的组成与功能
• 1.4.1 B细胞与特异性体液免疫功能
• 1.4.2 T细胞与特异性细胞免疫功能
• 1.5 免疫佐剂
• 1.5.1 抗原传递系统佐剂
• 1.5.2 铝盐佐剂
• 1.5.3 微生物来源的佐剂
• 1.5.4 细胞因子佐剂
• 1.5.5 天然来源佐剂
• 1.5.6 化学物质
• 1.6 动物微生态学及动物微生态制剂起源
• 1.6.1 益生菌的发展史
• 1.6.2 国外益生菌研究应用现状
• 1.6.3 中国动物微生态制剂研究与应用状况
• 1.6.4 益生菌的组成菌种
• 1.6.5 筛选菌株需注意的原则
• 1.6.6 益生菌在开发研制中存在的问题
• 1.6.7 乳酸菌及益生菌制剂的研究和发展趋势
• 1.7 立题的目的和意义
• 1.8 本课题主要研究内容与技术路线
• 2 试验一 L.casei Zhang 对病原菌的体外抑菌试验
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 3 试验二 L.casei Zhang 体内抑菌作用及对肠道菌群影响的研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 4 试验三 L.casei Zhang 对鸡肠细胞的粘附试验
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 5 试验四 L.casei Zhang 对体液免疫功能影响的研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 试验方法
• 5.2 结果
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 6 试验五 L.casei Zhang 对小白鼠 T 淋巴细胞亚群影响的研究
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 材料
• 6.1.2 方法
• 6.2 结果
• 6.3 讨论
• 6.4 小结
• 7 试验六 L.casei Zhang 对鸡新城疫和禽流感HI 抗体效价影响的研究
• 7.1 材料与方法
• 7.1.1 材料
• 7.1.2 方法
• 7.2 结果
• 7.3 讨论
• 7.4 小结
• 8 试验七 L.casei Zhang 肽聚糖对鸡新城疫和禽流感疫苗免疫佐剂作用的研究
• 8.1 材料与方法
• 8.1.1 材料
• 8.1.2 方法
• 8.2 结果
• 8.3 讨论
• 8.4 小结
• 9 试验八 L.casei Zhang DNA 对鸡新城疫和禽流感疫苗免疫佐剂作用的研究
• 9.1 材料与方法
• 9.1.1 材料
• 9.1.2 方法
• 9.2 结果
• 9.3 讨论
• 9.4 小结
• 10 总体讨论
• 11 结论
• 12 本研究的创新点
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 作者简介