肠球菌对氟喹诺酮类药物的敏感性与耐药机制研究

论文摘要

目的 检测肠球菌临床株在各类标本中的分布及对6种氟喹诺酮类药物的敏感性,为临床合理使用抗菌药和控制肠球菌感染提供指导;研究肠球菌Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与对氟喹诺酮类药物耐药性的关系,并探讨肠球菌中是否存在主动外排系统,以了解肠球菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制。 方法 应用二倍琼脂稀释法检测78株肠球菌临床株对6种氟喹诺酮类药物的敏感性;根据NCCLS标准,筛选出环丙沙星耐药株,PCR扩增其gyrA、gyrB、parC和parE基因的喹诺酮耐药决定区（QRDR）,并与标准敏感株核苷酸序列进行比较,分析基因突变与耐药的相关性;应用荧光法检测肠球菌耐药株和敏感株对环丙沙星的吸收量以及加入利血平后对环丙沙星吸收量的变化情况。 结果 78株肠球菌菌株中,粪肠球菌61株,占78.2%,屎肠球菌15株,占19.2%,其他肠球菌2株,占2.6%;肠球菌主要分离于尿液（61.6%）、伤口分泌物（25.6%）、痰液（7.7%）、和其他感染标本（5.1%）中。 6种药物的相对抗肠球菌活性(MIC50,MIC90)从强到弱为:妥舒沙星(MIC50,0.5mg/L;MIC90,2mg/L)>加替沙星(MIC50,1mg/L;MIC90,4mg/L),司帕沙星(MIC50,1mg/L;MIC90,4mg/L)>左氧氟沙星(MIC50,2mg/L;MIC90,16mg/L) >氧氟沙星(MIC50,4mg/L;MIC90,64mg╱L),环丙沙星(MIC50,4mg/L;MIC90,64mg/L);以妥舒沙星抗肠球菌活性最强,氧氟沙星和环丙沙星抗肠球菌活性最差。 以环丙沙星的MIC≥4mg/L解释为耐药为标准,从78株肠球菌中筛选出11株粪肠球菌环丙沙星耐药株、8株屎肠球菌环丙沙星耐药株,PCR扩增其Ⅱ型拓扑异构酶基因。测序后分析发现,粪肠球菌gyrA基因的QRDR第98或99位碱基G→T或T→G的突变导致所编码的第83位丝氨酸被异亮氨酸或精氨酸替代,而屎肠球菌仅第83位丝氨酸Ser（AGT）突变为精氨酸（AGG）;粪肠球菌gyrA基因的QRDR

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