论文摘要
YABBY基因家族参与了调控叶背腹极性发育,它们在决定侧生器官极性分化方面起重要作用。本研究从绿竹（Bambusa oldhami）中分离了BoYABBY1（BoYAB1）基因,并对其进行了表达模式和功能分析。主要结果如下:（1）从绿竹中克隆到了长度为766bp的cDNA序列,其中包括开放阅读框ORF（Open Reading Frame）为504bp,编码167个氨基酸。具有典型的YABBY基因家族结构,N端为zinc finger-like Domain,C端为YABBY Domain。（2）BoYAB1与其他物种YABBY基因家族的氨基酸序列进行比对,结果表明BoYAB1与FIL、GRAM、OsYAB2、TaYAB1、ZYB9和ZYB10的同源性分别为24.8%、57.5%、67.8%、39.9%、37.2%和37.5%。与毛竹（Phyllostachys pubescens）的属于YABBY家族的六个基因进行氨基酸同源性分析,BoYAB1与bphyem102c、bphyem104c、bphyem110b、bphylf026i、bphylf046c和bphyst007p的同源性分别为:47.4%、45.2 %、26.6 %、32.1 %、46.4 %和45.8 %。（3）系统进化树表明,BoYAB1与水稻的OsYAB1和OsYAB2,拟南芥的YAB2、YAB5和金鱼草的PROL有较近的亲缘关系。（4）构建了植物表达载体,转基因至拟南芥,转基因植株有两种表型,温和表型和严重表型。前者莲座叶背向性生长,开花时间约晚10天,植株出现矮化现象;后者莲座叶部分背向性,部分腹向性生长,且全部不能抽苔。（5）通过实时定量PCR,BoYAB1基因在绿竹的开花试管苗和营养生长试管苗中均有表达,前者的表达量约为后者的25倍。结果表明BoYAB1基因可能与绿竹成花有关。（6）原位杂交表明,BoYAB1转录本在绿竹开花试管苗的雄蕊原基和心皮原基中大量表达。结果表明BoYAB1基因可能与花器官的发育有一定的关系。
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摘要ABSTRACT第一章 文献综述1.1 竹子成花机理的研究现状1.2 极性建立1.3 调控近远轴面的基因1.3.1 MYB 基因家族1.3.2 HB 基因家族1.3.3 GARP 基因家族1.3.4 LOB 基因家族1.3.5 YABBY 基因家族1.3.5.1 双子叶植物1.3.5.2 单子叶植物1.4 研究目的与意义第二章 材料与方法2.1 实验材料和试剂2.1.1 植物材料及其生长条件2.1.2 菌株2.1.3 质粒2.1.4 主要试剂2.1.5 主要仪器2.1.6 引物2.2 实验方法2.2.1 植物组织DNA 的提取2.2.2 植物组织总RNA 的提取2.2.3 cDNA 第一条链的合成2.2.4 胶回收2.2.5 转化2.2.5.1 化学转化法2.2.5.2 电击法2.2.6 绿竹BoYAB1 基因的克隆2.2.7 生物信息学分析2.2.8 植物表达载体的构建2.2.9 电转化农杆菌GV3101 及检测2.2.10 拟南芥的遗传转化2.2.10.1 拟南芥的种植2.2.10.2 拟南芥的遗传转化2.2.10.3 转基因种子的筛选及种植2.2.11 转基因拟南芥植株的PCR 鉴定2.2.12 转基因植株的RT-PCR 半定量检测2.2.13 实时荧光定量PCR2.2.13.1 Bo YAB1 标准曲线的绘制2.2.13.2 Actin 标准曲线的绘制2.2.14 原位杂交2.2.14.1 石蜡切片2.2.14.2 探针的制备2.2.14.3 探针的水解2.2.14.4 探针的检测2.2.14.5杂交第三章 结果与分析3.1 BoYAB1 基因的克隆3.1.1 绿竹基因组DNA 和总RNA 的提取3.1.2 Bo YAB1 基因的克隆3.2 生物信息学分析3.2.1 Bo YAB1 的氨基酸组成及理化性质3.2.2 BoYAB1 同源氨基酸序列比对及系统进化树分析3.3 Bo YAB1 基因的分析表达3.3.1 实时荧光定量PCR3.3.2 原位杂交3.4 BoYAB1 基因的功能验证3.4.1 双元表达载体构建3.4.1.1 BoYAB1 基因编码区的分离、克隆和测序3.4.1.2 植物表达载体的构建与鉴定3.4.2 拟南芥遗传转化与功能分析3.4.2.1 电转化农杆菌 GV3101 及检测3.4.2.2 拟南芥遗传转化3.4.2.3 转基因植株的 PCR 检验3.4.2.4 半定量 RT-PCR 分析第四章 讨论4.1 试验方法讨论4.1.1 拟南芥的种植4.1.2 拟南芥的遗传转化4.1.3 原位杂交4.2 实验结果与讨论第五章 结论参考文献附录致谢个人简介发表论文情况
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