虾青素对日本沼虾生理生化特征的影响

论文摘要

本文从雨生红球藻中提取虾青素粗提液,高效液相色谱法测定其虾青素的含量,以此粗提液添加到日本沼虾的配合饲料中。分别从最适添加量的确定、对血细胞密度及吞噬活力（吞噬百分比和吞噬指数）的影响、对抗环境胁迫能力的影响和光保护作用等四个方面研究虾青素对日本沼虾的影响,并初步探讨其作用机理。在最适添加量的实验中,虾青素分为0、20、40、60、80和100 mg／kg等6个浓度梯度添加到日本沼虾的基础饲料中,在实验室条件下饲养7周。结果表明,添加量为40、60 mg／kg组的日本沼虾存活率显著增加（P<0.05）,尤其以添加量60 mg／kg组为最高。20、60、80 mg／kg组,增重率显著高于对照组（P<0.05）。故虾青素作为免疫添加剂其对日本沼虾的最适剂量为60 mg／kg。虾青素对日本沼虾抗氧化体系（CAT、SOD、总抗氧化能力）各指标的影响不同,综合60 mg／kg组虾青素对日本沼虾抗氧化体系的影响,确定最适投喂时间为3周。采用上述最适添加浓度和投喂时间展开下面的实验。以血淋巴细胞密度、吞噬百分比和吞噬指数为指标,评价了虾青素对日本沼虾非特异免疫的影响,该条件下日本沼虾的血细胞密度和血细胞吞噬活力（以吞噬百分比和吞噬指数表示）均显著提高（p<0.05）,表明添加虾青素可显著提高日本沼虾的非特异性免疫力。在温度突变胁迫（18℃-28℃72 h）、氨氮胁迫（18.7 mg／L、18℃84 h）下测定日本沼虾的存活率及其抗氧化水平在胁迫前后的变化,以衡量虾青素作为一种免疫添加剂对日本沼虾抗环境胁迫的影响。实验结果显示添加虾青素可显著提高日本沼虾的存活率、总抗氧化能力、SOD酶活性（P<0.05）,证明添加虾青素的日本沼虾对温度突变胁迫、氨氮胁迫的适应能力显著提高。在饲料中添加虾青素,取血细胞进行培养,UVA照射后通过单细胞凝胶电泳实验评价DNA损伤程度。结果显示,添加虾青素的实验组沼虾血细胞DNA损伤程度显著降低,证明虾青素具有强抗氧化性,可作为潜在的光保护剂,使细胞免受UVA所造成的损伤。综上所述,虾青素作为一种免疫添加剂,在添加量为60 mg／kg时可显著提高日本沼虾的存活率和增重率、血细胞密度和血细胞吞噬活力以及抗环境胁迫能力,并可保护细胞免受UVA的损伤。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 日本沼虾生物学特性
• 1.2 虾类的免疫系统
• 1.2.1 免疫应答的类淋巴器官和组织
• 1.2.2 免疫应答细胞
• 1.3 自由基和活性氧
• 1.3.1 常见的自由基和活性氧
• 1.3.2 自由基和活性氧的清除
• 1.4 甲壳动物免疫增强剂的研究
• 1.4.1 免疫增强剂种类
• 1.4.2 免疫增强剂的作用机理
• 1.5 虾青素对甲壳动物的影响及作用机理
• 1.5.1 虾青素做为免疫增强剂的作用
• 1.5.2 虾青素的作用机理
• 1.6 实验的目的和意义
• 第2章 虾青素提取及粗提液、基础饲料中虾青素含量的测定
• 引言
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.2 结果与讨论
• 第3章 虾青素投喂日本沼虾最适添加量的确定
• 引言
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果和分析
• 3.2.1 存活率和增重率
• 3.2.2 SOD活力
• 3.2.3 CAT活力
• 3.2.4 总抗氧化能力
• 3.3 讨论
• 第4章 虾青素对日本沼虾血细胞密度及吞噬活力的影响
• 引言
• 4.1 材料和方法
• 4.1.1 实验材料
• 4.1.2 实验仪器
• 4.1.3 实验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 血细胞密度
• 4.2.2 血细胞吞噬活力
• 4.3 讨论
• 第5章 虾青素对日本沼虾抗环境胁迫能力的影响
• 引言
• 5.1 材料和方法
• 5.1.1 日本沼虾
• 5.1.2 测定指标及方法
• 5.1.3 纳氏试剂比色法测定氨氮浓度
• 5.1.4 两种环境胁迫的方法（温度、氨氮）
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 环境胁迫对存活率的影响
• 5.2.2 添加虾青素对环境胁迫下日本沼虾总抗氧化能力的影响
• 5.2.3 添加虾青素对环境胁迫下日本沼虾SOD活力的影响
• 5.2.4 添加虾青素对环境胁迫下日本沼虾CAT活力的影响
• 5.3 讨论
• 第6章 虾青素对日本沼虾的光保护作用
• 引言
• 6.1 材料和方法
• 6.1.1 日本沼虾血淋巴细胞培养
• 6.1.2 单细胞凝胶电泳检测DNA损伤
• 6.1.3 实验所用仪器
• 6.2 结果和分析
• 6.3 讨论
• 结语
• 参考文献
• 致谢
• 附录