大鼠星形胶质细胞在突触形成与传递中的作用及其可能机制的探讨

论文摘要

在中枢神经系统中,突触周围一般都有星形胶质细胞的突起包绕,因此星形胶质细胞被看成是继突触前、后成份之后构成突触的第三成份。这些包绕突触的胶质细胞对突触到底如何起作用至今知之甚少。近十几年的研究表明,胶质细胞除起支持、分隔和营养作用外,还有调节神经元间的信号传递、神经分泌等作用,但对突触形成及突触可塑性作用的报告不多。胶质细胞能直接影响突触形成的证据主要源于Pfrieger和Barres等的工作,他们发现星形胶质细胞培养液能显著增加大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）形成突触的数量。迄今为止,在培养的海马、下丘脑、脊髓及干细胞来源的神经元上也得到同样的结果,而且发现外周神经系统施万细胞也参与神经肌肉连接处突触的形成和维持。但星形胶质细胞是通过何种机制影响突触形成和可塑性的至今尚不清楚。 以往的研究已显示,脑内固醇类物质如雌激素参与了神经系统的发育、性分化、生理和病理等,同时也被证明参与了部分突触功能的调节,故被称为“神经活性固醇（neuroactive steroids）”。本室曾研究证明胶质细胞瘤和神经干细胞中有高活性的芳香化酶表达,芳香化酶是神经类固醇物质代谢过程中关键的酶,能催化雄激素转化为雌激素,这提示星形胶质细胞可能合成雌激素。另外我们发现神经元中有丰富的ER-alpha和ER-beta两种雌激素受体（ER）表达。因此推测胶质细胞合成并分泌的雌激素可能通过雌激素受体作用于神经元,激活下游信号,参与了突触的形成与信息传递的调节过程。为验证我们的假设,本实验以纯培养新生大鼠皮层神经元为模型,用细胞培养、ELISA、免疫荧光技术、突触记数、膜片钳技术和FM 4-64活体染色标记的突触囊泡释放实验等方法探讨星形胶质细胞（AST）是否参与突触的形成和信息传递,及其可能的作用分子。我们实验获得的主要结果汇报如下: 1.纯培养的星形胶质细胞能合成并分泌雌激素,而纯培养神经元的上清液中则检测不到雌激素 在第一部分的实验中,我们首先对文献报道的原代皮层胶质细胞和神经元纯化和

论文目录

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• 引言
• 总材料与方法
• 一、细胞培养
• （一） 培养用溶液的配制
• （二）大脑皮层星形胶质细胞（AsT）的培养和纯化
• （三）大脑皮层神经元的纯培养和实验分组
• 二、ELISA方法
• 三.免疫荧光技术
• 四、突触记数方法和统计学方法
• 五、电生理记灵
• 六、FM4—64标记的突触囊泡释放实验
• 七、主要药品来源
• 八、主要实验仪器和软件
• 参考文献
• 第一部 分体外纯培养星形胶质细胞和神经元雌激素分 泌的实验研究
• 材料及方法
• 一、动物与材料
• 二、实验方法
• 实验结果
• 结论
• 第二部分 AST条件培养液（ACM）及外源性雌激素对 大鼠皮质神经元突触形成与功能影响的实验研究
• 材料及方法
• 一、动物与材料
• 二、实验分组与方法
• 实验结果
• 结论
• 第三部分 星形胶质细胞或ACM促进突触形成与功能的可能机制的探讨
• 材料及方法
• 一、动物与材料
• 二、实验分组与方法
• 实验结果
• 结论
• 全文讨论
• 全文总结
• 致谢
• 参考文献
• 文献综述 类固醇和脑功能的研究进展
• 学习期间发表和交流的文章