六味地黄方含药血清及其入血成分对大鼠前脂肪细胞增殖、分化的影响

论文摘要

目的探讨六味地黄方含药血清及其入血成分对大鼠前脂肪细胞内环腺苷酸、环鸟苷酸及其增殖、分化、分化过程中过氧化物酶增殖物活化受体PPARγ2 mRNA表达的影响。方法一、采用RP—HPLC法对六味地黄方含药血清中3入血成分进行鉴认及含量测定。二、培养大鼠皮下脂肪的前脂肪细胞,在其增殖与分化的不同阶段分别加六味地黄含药血清及其入血3成分,观察其对大鼠前脂肪细胞的增殖,分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)和细胞内脂肪积聚的作用。三、采用竞争性蛋白结合分析方法测定大鼠前脂肪细胞的cAMP、cGMP含量。四:应用半定量RT—PCR技术,观察不同浓度六味地黄超微含药血清对前脂肪细胞分化过程中PPARγ2 mRNA表达的影响。结果实验发现六味地黄方(汤、丸、超微)含药血清中含有3个入血成分:马钱苷、芍药苷、丹皮酚,它们在阴虚病理状态下血清中3种成分的含量比正常状态下的要高,且马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量都以超微最高,其次为丸剂、汤剂。六味地黄方对犬鼠前脂肪细胞的增殖有促进作用,并通过降低PPARγ基因的表达来抑制其分化过程中的GPDH的升高,对分化过程中的脂肪积聚有明显的促进分解作用,使前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞的过程受到抑制,其主要有效成分是马钱苷、芍药苷、丹皮酚,但其抑制作用以芍药苷最佳,促进作用以马钱苷最佳;该方还能降低前脂肪细胞内cAMP的水平,其主要有效成分是马钱苷。此外,六味地黄方汤、丸、超微三剂型中,超微饮片不但很好地保留了传统饮片的上述作用,而且作用强于六味地黄汤剂、丸剂。结论首先,六味地黄方对大鼠前脂肪细胞增殖、分化的作用,可望在分子水平与脂肪细胞相关疾病的基因治疗上提供较特异的靶点药物,有助于进一步探讨六味地黄方对人体脂肪代谢的影响;同时表明该方滋阴作用的机制之一可能是通过其含药血清中的主要成分马钱苷降低前脂肪细胞内cAMP浓度,作用于cAMP受体,以芍药苷、丹皮酚、马钱苷为主要有效成分促进该细胞的增殖并抑制其分化,使细胞功能也随之发生明显变化,进而调节基础代谢之一的脂肪代谢从而缓解阴虚症状;其次,在阴虚病理状态下机体对该方有效成分的吸收要高于正常状态,这对阐明六味地黄丸入血成分中各有效成分滋阴作用的机理,揭示其起滋阴作用的主要成分,从“证”的动物模型来研究中药复方的有效成分及不同剂型对药效的影响,具有一定的深远意义。此外,六味地黄方汤、丸、超微三剂型上述作用的比较研究,对研究各剂型因素对药效的影响及控制药物制剂的内在质量,超微饮片与传统饮片作用机理的对比研究向科学、规范方向发展有着较大的实用价值。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 六味地黄方含药血清及其入血成分的鉴定及含量测定
• 1 材料与方法
• 1.1 药物
• 1.2 动物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 最大耐受量试验及含药血清制备
• 1.6 RP-HPLC法测定六味地黄方含药血清中马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量
• 2 结果
• 2.1 最大耐受量试验结果
• 2.2 六味地黄方含药血清中马钱苷、芍药苷、丹皮酚含量测定结果
• 3 讨论
• 第二部分 六味地黄方含药血清及其入血成分对大鼠前脂肪细胞增殖、分化的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 药物
• 1.2 动物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 大鼠前脂肪细胞培养及增殖与分化模型的建立
• 1.6 六味地黄方含药血清及其入血成分对大鼠前脂肪细胞增殖、分化的作用
• 2 结果
• 2.1 大鼠前脂肪细胞的原代及传代培养
• 2.2 六味地黄方含药血清及其入血成分对大鼠前脂肪细胞增殖的影响
• 2.3 六味地黄方含药血清及其入血成分对大鼠前脂肪细胞分化过程的影响
• 2.4 六味地黄超微含药血清对大鼠前脂肪细胞内PPAR γ2基因表达的影响
• 3 讨论
• 第三部分 六味地黄含药血清及其3入血成分对大鼠前脂肪细胞内cAMP cGMP的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 药物
• 1.2 动物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 1.5 六味地黄方含药血清及其入血成分对大鼠前脂肪细胞内cAMP cGMP的影响
• 2 结果
• 2.1 六味地黄方含药血清及其入血成分对大鼠前脂肪细胞内cAMP cGMP的影响
• 3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 附录