不同来源地丹参主要化学成分含量与遗传多样性的研究

论文摘要

丹参是唇形科鼠尾草属多年生本草植物。丹参所含的多种水溶性酚酸和脂溶性二萜醌类活性成分具有心血管疾病预防、治疗和抗肿瘤等活性。随着研究的深入,丹参在疾病治疗上的功能得到越来越多的开发,医药市场对丹参的需求量也急剧增加,对丹参药材的质量标准也随之提高。丹参分布广泛,随着栽培品种的不同、栽培地的环境气候土壤条件等因素的变化,丹参药材的质量,特别是丹参有效活性成分的含量,有很大差异。本研究的主要目的就是,比较不同产地来源的丹参在杨凌本地栽种两年后其有效成分含量的差异、RAPD方法分析其遗传上的差异,并试图阐释不同产地丹参有效成分含量与其遗传上可能的联系。具体研究内容和结果如下:(1)本研究采用以质量百分比为70%的甲醇为溶剂一次同时提取丹参水溶性和脂溶性成分的超声提取方法,并摸索建立了一套可一次同时测定丹参水溶性成分和脂溶性成分的HPLC分离定量方法,简化了丹参成分的提取和分离定量程序,而且保证了不同样品间横向比较的可靠和准确性。(2)本研究收集了山东莱芜、山西芮城、安徽亳州、河北安国和北京总共5个产地的紫花丹参各20来株,栽种于杨凌地区。经过两年相同统一的栽培管理之后,随机采集不同来源地样品4～7个,总共29个样品,采用HPLC方法测定丹参的各成分含量,并以此为材料进行RAPD分析、聚类。(3)不同产地来源的丹参在杨凌气候、环境、土壤、栽培管理等完全相同的条件下栽种两年后,各有效成分含量在山东莱芜和安徽亳州丹参上中略高于在其他产地来源丹参中的含量,也存在个别含量异常高或低的植株,但在不同来源地的丹参之间并没有显著性差异。(4)对所有样品进行各水溶性和脂溶性成分相关分析表明,丹参脂溶性成分中,除了二氢丹参酮Ⅰ与丹参酮ⅡA含量之间的相关性较低外,各脂溶性成分间的相关性都非常显著;在丹参水溶性成分中,除了迷迭香酸和咖啡酸含量之间的相关性较低之外,各水溶性成分间的相关性也都很显著。因此,可以通过仅测定某一脂溶性成分如丹参酮ⅡA的含量变化水平来反映总丹参酮的含量变化水平;通过测定丹酚酸B或丹参素钠含量的变化水平来反映总丹酚酸类成分的含量变化水平。(5)丹参RAPD多态性条带分层聚类结果表明,大致可按丹参RAPD多态性条带的聚类将这些丹参按其产地来源进行归属。说明相同产地来源的丹参在遗传组成上表现出一定的相似性,而不同产地来源丹参在遗传组成上则差异较大。分别按丹参酮ⅡA、丹酚酸B含量进行分层聚类分析,则不能将这29个丹参样本按其真正产地来源聚为五类。且各有效成分含量在不同产地来源的丹参之间并没有显著性差异。我们可初作推断,丹参栽培地区的气候、环境、土壤、栽培管理等条件不能在短期内改变丹参的遗传组成,但其主要药用成分含量却受条件限制,不能表现出不同产地来源丹参的优势。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 丹参概述
• 1.1.1 丹参主要化学成分研究概况及其方法概述
• 1.1.2 丹参种质资源差异及其研究现状
• 1.1.3 丹参主要化学成分提取、分离、测定研究方法进展
• 1.2 DNA 分子标记技术简介
• 1.2.1 RFLP 标记技术
• 1.2.2 RAPDs 标记技术
• 1.2.3 AFLPs 标记技术
• 1.2.4 ISSR-PCR 技术
• 1.2.5 单核苷酸多态性
• 1.3 分子标记技术在植物资源研究方面的应用
• 第二章 实验材料的收集、准备
• 第三章 丹参各化学成分含量的HPLC 测定
• 3.1 试剂、仪器与材料
• 3.1.1 试剂
• 3.1.2 仪器
• 3.1.3 数据处理方法
• 3.1.4 材料
• 3.2 色谱条件
• 3.3 标准品配制方法
• 3.4 样品溶液制备方法
• 3.5 HPLC 方法一次性测定丹参水溶性和脂溶性成分的方法学考察试验
• 3.5.1 空白试验
• 3.5.2 线性试验
• 3.5.3 精密度试验
• 3.5.4 稳定性试验
• 3.5.5 重现性试验
• 3.6 样品各成分含量测定
• 3.7 实验结果与分析
• 3.7.1 线性试验结果及各标准品的标准曲线
• 3.7.2 方法学试验结果
• 3.7.3 标准品及丹参样品的HPLC 分离结果
• 3.7.4 不同产地丹参8 种成分含量测定结果
• 3.7.5 差异性分析
• 3.7.6 聚类分析
• 3.7.7 不同组分间相关性分析结果
• 第四章 不同产地来源丹参的RAPD 分析
• 4.1 丹参DNA 提取
• 4.1.1 试剂、仪器与材料
• 4.1.2 丹参DNA 的提取、纯化
• 4.1.3 丹参DNA 的检测
• 4.2 RAPD 分析
• 4.2.1 仪器、试剂和材料
• 4.2.2 RAPD-PCR 反应、扩增条件
• 4.2.3 电泳条件
• 4.2.4 凝胶成像仪拍照
• 4.2.5 统计分析方法
• 4.3 实验结果和分析
• 4.3.1 不同产地丹参的RAPD 条带电泳情况
• 4.3.2 不同产地丹参的RAPD 条带聚类结果
• 第五章 讨论和分析
• 5.1 丹参成分提取和测定的方法
• 5.2 丹参各成分含量及其比较
• 5.3 不同产地来源的丹参成分含量差异性分析
• 5.4 丹参各成分相关性分析
• 5.5 含量聚类分析
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介