胃病患者口腔幽门螺杆菌和胃内幽门螺杆菌感染关系的研究

论文摘要

自从1983年Warren和Marshall从胃炎患者的胃粘膜中首次分离出幽门螺杆菌（H.pylori）以来,国内外学者对H.pylori与胃肠道疾病的关系进行了大量深入的研究。现已确认H.pylori与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、胃粘膜相关淋巴样组织（MALT）恶性淋巴瘤等疾病密切相关。 口腔为上消化道入口,近年来,随着对H.pylori研究的不断深入,有学者提出口腔中亦有H.pylori的生存,并在消化不良患者的口腔中报道了极高的H.pylori检出率,认为口腔是H.pylori的另一个聚集地,且口腔H.pylori感染和胃内H.pylori感染有关。 但另一些学者发现口腔H.pylori检出率并不高,认为H.pylori在口腔中的存在是一过性的,是由胃液反流造成的。 本研究提取慢性胃病患者口腔及胃内H.pylori菌株DNA,依据H.pylori特异的尿素酶C基因、VacA基因和CagA基因设计引物,通过聚合酶链反应（PCR）,检测和鉴定胃病患者牙菌斑及胃粘膜的H.pylori,明确胃病患者的口腔中H.pyfori感染状况,并用PCR-SSCP分析技术,对口腔和胃内H.pylori菌株DNA基因型进行分析、比较,以探讨口腔和胃内H.pylori感染的相关性。浙江大学硕士学位论文实验方法1.病例选择、菌株来源:病例均为2004年7月一200刁:年n月本院消化内科门诊患者,共141例,其中男性72例,女性69例,年龄为18一69岁。对其中有H.pylori感染者取其口腔牙菌斑及胃粘膜活检标本进行H.pyl（）ri的分析研究。H.pylori标准参考株为NCTC 1 1637。2.DNA制备:采用直接裂解法抽提口腔牙菌斑H.pylori DNA,采用基因组DNA快速制备试剂盒（上海申能博彩生物科技有限公司）抽提胃粘膜H.pyl。ri DNA。3.PCR:引物序列:VaeA基因:上游5’一GTC AGC厂、TC ACA CCG CAAC一3’,下游5’一CTG CTT GAA TGC GCC AAAC一3’;UreC基因:上游5’一GGA TAA GCT TTTAGG GGT GTT AGG GG一3’,下游5’一GCT TAC TTT CTA ACA CTA ACG CGC一3’;CagA基因:上游5’一AAT ACA CCA ACG CCT CCA AG一3’,下游5’一TTG TTG CCG CTT TTGCTC TC一3’。PCR反应总体积为10Oul,内含:20pmolVaeA基因,SOpmol UreC基因,IOpmol CagA基因,2.snunol/1 MgCLZ,3U Ex一Taq酶,IOul IOXPCR缓冲液,0.25mmol/1 dNTP,20ul模板。PCR反应参数:940 C smin,X 1 eyele;940 C 3Osee,500 C 30see,72‘C lmin,X 10 eyeles;72‘C+5 see/eyele,X 25 eyeles;72。C 7min,Xl eyele。4.SSCP:su1PCR扩增产物+8ul变性液（98%去离子甲酞胺、IOmmol/1 EDTA、0.25%澳酚蓝）一100‘Cx10min一冰水浴一4‘C、110V、80rk聚丙烯酞胺电泳一o.20/0f肖酸银X IOmin一3%碳酸钠显色。结果1.病例选择、菌株来源:141例患者中诊断为H.pylori感染者59例,感染率为41.84%。经胃镜和病理组织学检查证实,59例病例中诊断为慢性浅表性胃炎31例,

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、论文正文
• 前言
• 材料方法
• 第一部分
• 第二部分
• 第三部分
• 第四部分
• 讨论
• 参考文献
• 四、综述
• 五、病例分析
• 六、致谢