乙型肝炎患者外周血单个核细胞中FoxP3mRNA的表达水平

乙型肝炎患者外周血单个核细胞中FoxP3mRNA的表达水平

论文摘要

目的:乙型肝炎的发病机制与机体免疫功能有关,目前认为CD4+CD25+T细胞是机体免疫系统维持外周耐受的重要调节者,可能参与乙型肝炎病毒感染慢性化的过程,CD4+CD25+Treg细胞可通过分泌细胞因子IL-10、TGF-β发挥免疫抑制作用。近年研究发现CD4+CD25+T调节细胞特征性的分子标记是Foxp3,对FoxP3的研究日益成为研究的热点。本研究主要探讨HBV感染患者外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达及其与乙肝病毒感染后转归的关系;应用ELISA法检测这些患者血清中IL-10、TGF-β的含量,并观察他们与Foxp3 mRNA的相关性。方法:分别收集19例急性乙肝、50例慢性乙肝、21例乙肝后肝硬化、15例慢性乙型重型肝炎患者和15例正常对照组外周EDTA抗凝血2ml,分离外周血单个核细胞、总RNA抽提、逆转录cDNA、real-time FQ-PCR扩增检测Foxp3mRNA的表达;同时应用ELISA法检测其血清中IL-10、TGF-β的含量,并进行IL-10、TGF-β含量与Foxp3 mRNA的相关性分析。结果:急性乙肝、慢性乙肝、肝硬化、慢性重型肝炎患者Foxp3 mRNA水平分别为(0.15±0.13)%、(0.18±0.14)%、(0.16±0.12)%、(0.27±0.17)%,均高于正常对照组(0.04±0.00)%(P<0.05),重型肝炎Foxp3 mRNA水平高于其他各组(P<0.05)。HBV感染各组IL-10含量(单位pg/ml)分别为272.68±87.88、225.85±83.16、230.82±81.77、247.80±91.15,和正常组(133.61±42.84)比较明显升高(P<0.05),急性乙肝较慢性乙肝明显升高(P<0.05)。HBV感染各组TGF-β含量(单位pg/ml)分别为246.05±82.79、145.07±74.93、225.73±78.37、319.00±97.50,与正常对照组(99.14±56.27)比较有统计学意义(P<0.05),急性乙肝组和肝硬化组、重型肝炎组比较,差异无统计学意义(P>0.05),其他各组两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。IL-10、TGF-β与Foxp3 mRNA表达水平无相关性。结论:急性乙肝、慢性乙肝、肝硬化、慢性重型肝炎患者Foxp3 mRNA水平高于正常人,重型肝炎患者Foxp3 mRNA水平高于其他各组HBV感染者,提示Foxp3可能参与了HBV感染的发病过程,外周血单个核细胞中Foxp3mRNA的表达水平可能与疾病预后密切相关。IL-10、TGF-β与Foxp3 mRNA表达水平无相关性。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 缩略词表
  • 前言
  • 第一部分 实验方法
  • 1 临床资料
  • 1.1 病例来源
  • 1.2 诊断及纳入标准
  • 1.3 分组情况
  • 2.试剂及设备
  • 2.1 PCR主要试剂设备
  • 2.2 ELISA主要设备
  • 2.3 real-time FQ-PCR实验方法、步骤
  • 2.3.1 real-time FQ-PCR试验前的准备
  • 2.3.2 PBMC的分离
  • 2.3.3 总RNA的抽提
  • 2.3.4 逆转录cDNA
  • 2.3.5 real-time FQ-PCR检测
  • 2.4.ELISA操作步骤
  • 2.5.统计方法
  • 第二部分 结果
  • 1.不同HBV感染者外周血Foxp3 mRNA的表达
  • 2.不同HBV感染者血清IL-10、TGF-β的含量比较
  • 3.Foxp3的表达与血清IL-10、TGF-β的相关性
  • 第三部分 讨论
  • 第四部分 结论
  • 参考文献
  • 文献综述
  • 在读期间发表论文
  • 致谢
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