本文主要研究内容
作者王凯（2019）在《基于JAK-STAT1信号通路探讨植物乳杆菌上清抗TGEV感染的机制》一文中研究指出：猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis,TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）引起的一种以严重腹泻、呕吐和脱水为临床症状的急性、高度接触性肠道传染病。其对两周龄以内的仔猪有极高的致死率,给养猪业带来极大的危害。现有的TGEV疫苗并不能产生理想的防治效果,因此以新方法防治猪传染性胃肠炎显得尤为重要。益生菌普遍存在于动物肠道中,有助于促进肠道蠕动、维持肠道稳态。目前研究表明多种益生菌可发挥抗病毒作用。本课题组前期成功分离并鉴定出一株植物乳杆菌,将其命名为LP-1,试验发现经该菌株上清（LP-1 supernatant,LP-1S）处理后,ST细胞能对TGEV感染产生明显的抑制作用。但LP-1S作用于猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）是否能抑制TGEV在该细胞内增殖,其具体机制目前尚无文献报道。本试验通过探究LP-1S作用于IPEC-J2细胞是否能对TGEV在该细胞内复制产生抑制效果,并进一步检测LP-1S处理后的IPEC-J2细胞感染TGEV不同时间点细胞诱导IFN-β水平,胞内STAT1磷酸化、p-STAT1核易位情况及部分ISGs转录及蛋白表达产生的影响,初步阐明LP-1S通过影响IPEC-J2细胞内JAK-STAT1信号通路发挥抗TGEV的作用机制。主要研究内容如下:1、LP-1S处理后IPEC-J2细胞内TGEV的复制情况（1）MTT法检测发现1/4倍稀释LP-1S为作用IPEC-J2细胞的最大无毒剂量;利用Western-blot检测发现LP-1S在IPEC-J2细胞中抗TGEV效果具有浓度依赖性,最佳浓度剂量为1/4倍稀释。（2）1/4倍稀释的LP-1S作用于IPEC-J2细胞后感染TGEV GFP Miller（MOI=0.1）株,在不同时间点通过倒置荧光显微镜观察TGEV GFP Miller株的荧光强度,发现LP-1S预处理组荧光数目明显少于未处理组;TCID50检测结果显示24h、48h LP-1S处理组较同时间点TGEV攻毒组均有极显著差异（P<0.01）。利用绝对荧光定量PCR、Western-blot分别检测IPEC-J2细胞中TGEV Miller N基因的病毒拷贝数和N蛋白的表达量,发现12h LP-1S预处理组较TGEV攻毒组N基因拷贝数有显著差异（0.01<P<0.05）,N蛋白表达水平无显著差异（0.05<P）;24h、48h两组N基因拷贝数及蛋白表达水平均有极显著差异（P<0.01）。2、LP-1S处理后IPEC-J2细胞内IFN-β诱导情况、STAT1磷酸化水平及核易位情况将IPEC-J2细胞分为三组分别为植物乳杆菌上清预处理攻毒、攻毒组和空白对照组不同时间点收集细胞液上清,利用ELISA试剂盒检测不同组份细胞诱导IFN-β产生水平,结果发现不同时间段中植物乳杆菌上清预处理组诱导IPEC-J2细胞产生IFN–β水平较TGEV感染组均有极显著差异（P<0.01）。利用Western-blot技术检测三组不同时间点STAT1蛋白磷酸化水平发现,LP-1S处理组感染TGEV后期（24h48h）STAT1磷酸化水平较TGEV感染组有极显著差异（P<0.01）。通过激光共聚焦显微镜发现,在12h LP-1S处理组感染TGEV后p-STAT1核易位水平较TGEV感染组有显著差异（0.01<P<0.05）,24h、48h LP-1S处理组感染TGEV较TGEV直接感染组p-STAT1核易位水平有极显著差异（P<0.01）。3、LP-1S处理后IPEC-J2细胞内部分ISGs转录水平及ZAP、PKR蛋白表达情况按上述将IPEC-J2分为三组,利用相对荧光定量PCR检测不同时间点胞内部分ISGs基因的转录水平。结果发现这些基因在TGEV感染后24h-48h,LP-1S预处理组ISGs转录水平较TGEV攻毒组均有极显著差异（0.01<P<0.05）,其中两组Mx1、Mx2的转录水平在24h均达到最高值,PKR、ZAP、OASL、ISG15的基因转录水平与时间呈正相关,在48h达到峰值。Western-blot结果显示24h LP-1S处理后感染TGEV组胞内PKR蛋白表达水平在24h、48h较TGEV感染组有极显著差异（P<0.01）;ZAP蛋白表达水平在24h、48h较TGEV感染组有显著差异（0.01<P<0.05）,ZAP和PKR的蛋白表达结果同mRNA转录趋势一致;此外,两组p-PKR/PKR比值在不同时间点（24h、48h）均无显著差异（0.05<P）;24h LP-1S处理后攻毒组p-PKR/β-Tubulin比值显著高于TGEV攻毒组（0.01<P<0.05）,48h LP-1S处理后攻毒组p-PKR/β-Tubulin比值极显著高于TGEV攻毒组（0.01<P<0.05）。
Abstract
zhu chuan ran xing wei chang yan （Transmissible gastroenteritis,TGE）shi you zhu chuan ran xing wei chang yan bing du （Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）yin qi de yi chong yi yan chong fu xie 、ou tu he tuo shui wei lin chuang zheng zhuang de ji xing 、gao du jie chu xing chang dao chuan ran bing 。ji dui liang zhou ling yi nei de zai zhu you ji gao de zhi si lv ,gei yang zhu ye dai lai ji da de wei hai 。xian you de TGEVyi miao bing bu neng chan sheng li xiang de fang zhi xiao guo ,yin ci yi xin fang fa fang zhi zhu chuan ran xing wei chang yan xian de you wei chong yao 。yi sheng jun pu bian cun zai yu dong wu chang dao zhong ,you zhu yu cu jin chang dao ru dong 、wei chi chang dao wen tai 。mu qian yan jiu biao ming duo chong yi sheng jun ke fa hui kang bing du zuo yong 。ben ke ti zu qian ji cheng gong fen li bing jian ding chu yi zhu zhi wu ru gan jun ,jiang ji ming ming wei LP-1,shi yan fa xian jing gai jun zhu shang qing （LP-1 supernatant,LP-1S）chu li hou ,STxi bao neng dui TGEVgan ran chan sheng ming xian de yi zhi zuo yong 。dan LP-1Szuo yong yu zhu xiao chang shang pi xi bao （IPEC-J2）shi fou neng yi zhi TGEVzai gai xi bao nei zeng shi ,ji ju ti ji zhi mu qian shang mo wen suo bao dao 。ben shi yan tong guo tan jiu LP-1Szuo yong yu IPEC-J2xi bao shi fou neng dui TGEVzai gai xi bao nei fu zhi chan sheng yi zhi xiao guo ,bing jin yi bu jian ce LP-1Schu li hou de IPEC-J2xi bao gan ran TGEVbu tong shi jian dian xi bao you dao IFN-βshui ping ,bao nei STAT1lin suan hua 、p-STAT1he yi wei qing kuang ji bu fen ISGszhuai lu ji dan bai biao da chan sheng de ying xiang ,chu bu chan ming LP-1Stong guo ying xiang IPEC-J2xi bao nei JAK-STAT1xin hao tong lu fa hui kang TGEVde zuo yong ji zhi 。zhu yao yan jiu nei rong ru xia :1、LP-1Schu li hou IPEC-J2xi bao nei TGEVde fu zhi qing kuang （1）MTTfa jian ce fa xian 1/4bei xi shi LP-1Swei zuo yong IPEC-J2xi bao de zui da mo du ji liang ;li yong Western-blotjian ce fa xian LP-1Szai IPEC-J2xi bao zhong kang TGEVxiao guo ju you nong du yi lai xing ,zui jia nong du ji liang wei 1/4bei xi shi 。（2）1/4bei xi shi de LP-1Szuo yong yu IPEC-J2xi bao hou gan ran TGEV GFP Miller（MOI=0.1）zhu ,zai bu tong shi jian dian tong guo dao zhi ying guang xian wei jing guan cha TGEV GFP Millerzhu de ying guang jiang du ,fa xian LP-1Syu chu li zu ying guang shu mu ming xian shao yu wei chu li zu ;TCID50jian ce jie guo xian shi 24h、48h LP-1Schu li zu jiao tong shi jian dian TGEVgong du zu jun you ji xian zhe cha yi （P<0.01）。li yong jue dui ying guang ding liang PCR、Western-blotfen bie jian ce IPEC-J2xi bao zhong TGEV Miller Nji yin de bing du kao bei shu he Ndan bai de biao da liang ,fa xian 12h LP-1Syu chu li zu jiao TGEVgong du zu Nji yin kao bei shu you xian zhe cha yi （0.01<P<0.05）,Ndan bai biao da shui ping mo xian zhe cha yi （0.05<P）;24h、48hliang zu Nji yin kao bei shu ji dan bai biao da shui ping jun you ji xian zhe cha yi （P<0.01）。2、LP-1Schu li hou IPEC-J2xi bao nei IFN-βyou dao qing kuang 、STAT1lin suan hua shui ping ji he yi wei qing kuang jiang IPEC-J2xi bao fen wei san zu fen bie wei zhi wu ru gan jun shang qing yu chu li gong du 、gong du zu he kong bai dui zhao zu bu tong shi jian dian shou ji xi bao ye shang qing ,li yong ELISAshi ji he jian ce bu tong zu fen xi bao you dao IFN-βchan sheng shui ping ,jie guo fa xian bu tong shi jian duan zhong zhi wu ru gan jun shang qing yu chu li zu you dao IPEC-J2xi bao chan sheng IFN–βshui ping jiao TGEVgan ran zu jun you ji xian zhe cha yi （P<0.01）。li yong Western-blotji shu jian ce san zu bu tong shi jian dian STAT1dan bai lin suan hua shui ping fa xian ,LP-1Schu li zu gan ran TGEVhou ji （24h48h）STAT1lin suan hua shui ping jiao TGEVgan ran zu you ji xian zhe cha yi （P<0.01）。tong guo ji guang gong ju jiao xian wei jing fa xian ,zai 12h LP-1Schu li zu gan ran TGEVhou p-STAT1he yi wei shui ping jiao TGEVgan ran zu you xian zhe cha yi （0.01<P<0.05）,24h、48h LP-1Schu li zu gan ran TGEVjiao TGEVzhi jie gan ran zu p-STAT1he yi wei shui ping you ji xian zhe cha yi （P<0.01）。3、LP-1Schu li hou IPEC-J2xi bao nei bu fen ISGszhuai lu shui ping ji ZAP、PKRdan bai biao da qing kuang an shang shu jiang IPEC-J2fen wei san zu ,li yong xiang dui ying guang ding liang PCRjian ce bu tong shi jian dian bao nei bu fen ISGsji yin de zhuai lu shui ping 。jie guo fa xian zhe xie ji yin zai TGEVgan ran hou 24h-48h,LP-1Syu chu li zu ISGszhuai lu shui ping jiao TGEVgong du zu jun you ji xian zhe cha yi （0.01<P<0.05）,ji zhong liang zu Mx1、Mx2de zhuai lu shui ping zai 24hjun da dao zui gao zhi ,PKR、ZAP、OASL、ISG15de ji yin zhuai lu shui ping yu shi jian cheng zheng xiang guan ,zai 48hda dao feng zhi 。Western-blotjie guo xian shi 24h LP-1Schu li hou gan ran TGEVzu bao nei PKRdan bai biao da shui ping zai 24h、48hjiao TGEVgan ran zu you ji xian zhe cha yi （P<0.01）;ZAPdan bai biao da shui ping zai 24h、48hjiao TGEVgan ran zu you xian zhe cha yi （0.01<P<0.05）,ZAPhe PKRde dan bai biao da jie guo tong mRNAzhuai lu qu shi yi zhi ;ci wai ,liang zu p-PKR/PKRbi zhi zai bu tong shi jian dian （24h、48h）jun mo xian zhe cha yi （0.05<P）;24h LP-1Schu li hou gong du zu p-PKR/β-Tubulinbi zhi xian zhe gao yu TGEVgong du zu （0.01<P<0.05）,48h LP-1Schu li hou gong du zu p-PKR/β-Tubulinbi zhi ji xian zhe gao yu TGEVgong du zu （0.01<P<0.05）。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自西南大学的王凯，发表于刊物西南大学2019-09-24论文，是一篇关于猪传染性胃肠炎病毒论文,干扰素论文,信号传导及转录激活因子论文,干扰素刺激基因论文,西南大学2019-09-24论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西南大学2019-09-24论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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