抗CXCR4多肽抑制小鼠脉络膜黑色素瘤肝脏微转移的实验研究

论文摘要

研究背景：脉络膜黑色素瘤为眼部最常见的肿瘤，而肝脏转移为其致死最主要原因之一，但其具体机制仍不清楚，目前认为可能与化学趋化因子受体CXCR4有关。CXCR4为化学趋化因子SDF-1（Stromal cell-derived factor-1）受体，为7次跨膜G蛋白耦联受体，被SDF-1激活后可下调包括磷酯酰肌醇-3激酶，丝裂原活化蛋白激酶等一系列病理通道活性，从而调控细胞生长及转移。最早发现CXCR4与HIV感染有关。多项研究表明CXCR4在乳腺癌、前列腺癌、肺癌及恶性黑色素瘤等多种恶性肿瘤中均有表达，且对肿瘤的远处器官转移有着重要的促进作用，故抑制CXCR4活性有可能减少肿瘤细胞的生长及转移。T140为14氨基酸多肽，已被证实有较高的抗HIV能力，主要通过与SDF-1竞争结合CXCR4而抑制其活性。TNl40003为其新改进的复合物，较T140有更低的毒性及更高的稳定性。目的：分析抗CXCR4多肽TN14003对小鼠脉络膜黑色素瘤肝脏微转移的抑制作用。方法：1．采用RT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光方法检测CXCR4在B16LS9细胞及MetB16LS9细胞内的表达。2．肿瘤细胞侵袭力分析：将B16LS9分别在SDF-1+TN14003、SDF-1下培养，并将普通培养液组下培养作为对照组，采用分光光度计计数转移至胶原膜内的细胞，分别对各组进行侵袭力分析。3．建立小鼠脉络膜黑色素瘤模型：将5×105cells／2.5μl的B16LS9黑色素瘤细胞分别注入24只小鼠右眼脉络膜上腔建立小鼠脉络膜黑色素瘤模型。24只小鼠被随机分为3组，组1与组2分别在种植B16LS9黑色素瘤3天前及当天腹腔内注射1mM多肽；组3在种植B16LS9黑色素瘤细胞当天腹腔内注射PBS。4．对小鼠葡萄膜黑色素瘤原发病灶及肝转移病灶进行免疫组化分析：在种植肿瘤细胞后第7天摘除小鼠右眼，第28天处死小鼠并收集肝脏。进行CXCR4、MMP-2、TGF-β2、Ki-67分析，并对肝脏微转移灶进行计数比较。结果：1．CXCR4在小鼠恶性黑色素瘤中的表达：RT-PCR、Western-blot及细胞免疫荧光显示在小鼠恶性黑色素瘤细胞中有CXCR4的表达。2．体外试验中TN14003对小鼠恶性黑色素瘤细胞侵袭的抑制作用：各组侵袭数分别为：SDF-1组为0.361±0.056：SDF-1+TN14003为0.244±0.060；普通培养液组为0.267±0.0131。经TN14003治疗组与另两组比较有统计学意义。3．TN14003对小鼠恶性黑色素瘤转移的抑制：眼内原发肿瘤中，各组CXCR4表达无明显差异；MMP-2、TGF-β2及Ki-67在组1中的表达明显低于组2及组3：各组小鼠肝转移数分别为组1：67.43±27.36；组2：171.14±65.87；组3：145.71±112.35。组1与组2、组3比较均有显著性差异，但组2与组3间比较无显著性差异。CXCR4在各组肝脏病灶中的表达无明显差异，Ki-67在组1中的表达明显低于组3。结论：1．CXCR4在小鼠B16LS9细胞中有表达。2．SDF-1可促进B16LS9细胞的侵袭，而TNl4003则明显抑制B16LS9细胞的侵袭能力。3．TN14003对小鼠脉络膜黑色素瘤肝脏微转移具有抑制作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 第三章 实验结果
• 3.1 CXCR4在小鼠脉络膜黑色素瘤B61LS9细胞中的表达
• 3.2 抗CXCR4多肽TN14003抑制小鼠脉络膜黑色素瘤细胞的侵袭及转移
• 第四章 讨论
• 4.1 CXCR4在小鼠脉络膜黑色素瘤细胞中的表达
• 4.2 TN14003抑制小鼠脉络膜黑色素瘤细胞的侵袭
• 4.3 TN14003抑制小鼠脉络膜黑色素瘤细胞的转移
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢