烟酸促进胆固醇逆转运在体和离体研究

论文摘要

背景和目的流行病学研究发现,人群中血浆高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）水平与冠心病发生率呈负相关,提示HDL具有抗动脉粥样硬化作用。长期以来,用来解释HDL这一抗动脉粥样硬化作用机制主要是HDL参与胆固醇逆转运（RCT）过程。RCT是机体排出过多胆固醇的唯一途径,也是目前认为机体内对抗动脉粥样硬化发生的主要机制之一。烟酸具有全面而独特的调脂作用,是最有效的升高HDL-C的药物。有实验证实烟酸能减缓颈动脉内中膜厚度即动脉粥样硬化发展进程,我们推测其中重要机制是烟酸促进体内的RCT,但具体作用机制不明。已知有三磷酸腺苷结合盒转运体超家族（ABCA1、ABCG1、ABCG5、ABCG8等）和细胞色素P450家族的胆固醇7α羟化酶（CYP7α）等多种蛋白、受体、转运体参与RCT,并受核受体家族的成员肝X受体（LXRα）及其上游基因过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPARγ）的调节。以往有研究报道烟酸可促进ABCA1介导的细胞胆固醇流出,然而此类研究均为体外研究,未能系统反应体内烟酸对RCT的影响,有关烟酸对RCT进程其他转运体的影响也未见相关报道。本研究采用本中心已建立的替代方法测定烟酸作用后巨噬细胞体内、体外RCT的效率,并深入探讨其机制,从而了解烟酸对胆固醇逆转运的影响。方法以烟酸（0、1%,w/w）干预4周的C57BL/6J小鼠为模型,分别腹腔注射经已酰化低密度脂蛋白（Ac-LDL）荷脂与3H-胆固醇标记的巨噬细胞悬液,用液闪计数仪测定血清、肝脏、粪便中3H-胆固醇的含量;以不同剂量（0、0.2、1.0、5.0mM）烟酸干预巨噬细胞,HDL介导,测定细胞胆固醇流出;以RT-PCR方法检测肝组织CYP7α,肝脏和小肠ABCG5、LXRα,巨噬细胞SR-BI、ABCA1、ABCG1、LXRα、PPARγ的转录水平表达;再用Western-blot方法检测肝脏和小肠的ABCG5、LXRα,巨噬细胞ABCG1、LXRα的蛋白水平表达。结果1.烟酸明显降低小鼠血清总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）,降低幅度分别为40和63%（P＜0.01）;轻度降低血清甘油三酯（TG）（P＜0.05）;升高高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）14%。2.与对照组比较,烟酸组小鼠血清中3H-胆固醇的分布降低20%（P＜0.05）,而肝脏及粪便中3H含量却明显增多,增幅分别为19%和21%（P＜0.05）。3.烟酸分别增加肝脏和小肠组织中ABCG5 mRNA表达1.3倍和1.7倍（P＜0.05）;上调CYP7α的表达125.9%（P＜0.05）;分别增加肝脏和小肠LXRαmRNA的表达1.2倍和2.1倍（P＜0.05）。4.对照组肝脏ABCG5和LXRα的蛋白质水平基本没有表达,但烟酸干预后两种组织的ABCG5和LXRα蛋白表达明显增强,分别增加了40和30倍（P＜0.01）。5.烟酸可呈浓度依赖性增加巨噬细胞中HDL介导的胆固醇流出。0、0.2、1.0和5.0mM浓度的烟酸干预时,胆固醇流出率分别为2.35±0.35,4.58±0.16,7.24±0.29,13.26±0.43。6.SR-BI在巨噬细胞中有较高表达,但与对照组（0.72±0.08）比较,烟酸浓度的升高对SR-BI表达的影响无显著性差异（P＞0.05）。7.烟酸呈浓度依赖性增加ABCA1、ABCG1、LXRα和PPARγmRNA的表达。8.巨噬细胞ABCG1和LXRα蛋白表达与烟酸的浓度呈剂量依赖性增加。结论1.烟酸降低小鼠血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯,升高高密度脂蛋白胆固醇。2.烟酸促进小鼠体内巨噬细胞胆固醇逆转运。3.烟酸可能通过上调体内LXRα,从而刺激ABCG5、CYP7α表达来发挥促进小鼠体内胆固醇逆转运作用。4.烟酸可剂量依赖性促进由ABCA1和ABCG1介导的巨噬细胞胆固醇外流,可能与其上调PPARγ和LXRα表达有关。5.烟酸促进巨噬细胞胆固醇流出机制可能与细胞膜SR-BI的表达量无关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章：烟酸对巨噬细胞胆固醇流出的影响
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二章：烟酸调节小鼠血脂及体内胆固醇逆转运研究
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三章：烟酸对小鼠体内胆固醇逆转运影响及其机制研究
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述一 胆固醇逆转运与动脉粥样硬化
• 综述二 烟酸与动脉粥样硬化
• 致谢
• 在读期间发表的主要论文、参编情况