路氏滋燥汤对干燥综合征小鼠免疫病理的影响

论文摘要

一目的:从路氏滋燥汤对诱导型干燥综合征（Sj（?）gren’s syndrome,SS）小鼠免疫学、病理学影响的角度,探讨干燥综合征发病机理及路氏滋燥汤治疗干燥综合征的作用机制。二方法:选用C57小鼠为实验对象,用同种异体小鼠的颌下腺制备抗原,加CFA（完全弗氏佐剂）,加白百破疫苗给动物多点注射,诱导SS（干燥综合征）动物模型。造模第二天开始给治疗组小鼠以路氏滋燥汤治疗,每天一次,空白组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。两周后处死动物,测量各组小鼠的体重,最后一周的饮水量;用流式细胞仪检测各组小鼠颌下腺细胞凋亡率,用免疫组化法测各组小鼠颌下腺白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）、干扰素-r（interferon-r,IFN-r）、Fas及Fasl的含量;同时光镜下观察各组动物颌下腺的病理变化。三结果:（一）处死前动物体重测量结果:空白组体重和其他三组有明显差异（P＜0.05）,而其他三组之间无显著差异。可见SS小鼠由于唾液分泌减少,直接影响到其进食量。（二）处死前一周动物饮水量测量结果:结果显示各组之间无显著性差异,提示早期淋巴细胞浸润状况与饮水量之间无直接相关关系。（三）动物颌下腺细胞凋亡率检测结果:空白组和其他三组有非常显著的差异（P＜0.01）,模型组和两个治疗组也有显著差异（P＜0.05）,两个治疗组之间无显著差异。可见造模动物出现了明显的SS体征,而路氏滋燥汤可有效降低颌下腺细胞的凋亡率。（四）颌下腺IL10O、IFN-γ检测结果显示:模型组小鼠颌下腺中IFN-γ表达水平与正常组相比有显著增高,而IL-10水平非常低。因此我们认为,在我们所建立的SS模型小鼠颌下腺中浸润的淋巴细胞主要是识别自身颌下腺组织的Th1细胞,Th1细胞分泌IFN-γ等细胞因子,这些细胞因子又发挥正反馈的作用,进一步刺激Th细胞增殖并向Th1细胞分化,Th1细胞发挥辅助作用,促使CTL细胞增殖并特异识别杀伤颌下腺组织细胞,从而导致模型小鼠颌下腺中浸润淋巴细胞增多,病变逐渐加重。IFN-γ同时抑制了Th2分泌IL-10。（五） SS小鼠颌下腺凋亡相关基因Fas和Fasl免疫组化分析:结果显示模型组Fas和Fasl高度表达,可见腺泡及导管上皮细胞的凋亡可能是导致分泌功能损伤的机制。治疗组比模型组凋亡因子表达降低,可见路氏滋燥汤可有效降低细胞凋亡基因的表达。（六）镜下观察小鼠颌下腺病理变化:C57品系小鼠模型组,给药组均出现不同程度的腺体间淋巴细胞浸润,较大灶性淋巴细胞浸润中可见生发中心,淋巴细胞浸润灶内常见浆细胞,而间质中极少;导管上皮过度增生,管腔扩张或完全闭锁,形成所谓的肌上皮岛。部分血管扩张;大量腺实质破坏。（见彩图）四结论路氏滋燥汤对SS小鼠颌下腺的免疫病理损伤有明显的抑制作用。其作用可能是通过调节淋巴细胞的比例以及颌下腺细胞凋亡相关因子和基因的表达来实现的。其具体途径是,一方面降低Th1细胞分泌IFN-γ,减少CTL细胞增殖,减少颌下腺细胞的损伤;另一方面降低细胞凋亡相关基因Fas和Fasl的表达,降低腺泡及导管上皮细胞的凋亡,进而减轻了颌下腺分泌功能的损伤。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写表
• 文献综述1
• 干燥综合征中医药治疗概况
• 文献综述2
• 干燥综合征动物模型研究进展
• 前言
• 1.主要病因病机
• 2.主要证候和治则治法
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 实验分组
• 2.2 造模方法
• 2.2.1 颌下腺抗原制备方法
• 2.2.2 造模给药方法
• 2.3 取材
• 2.4 观察、检测项目与方法
• 2.4.1 动物一般情况
• 2.4.2 动物体重测量
• 2.4.3 处死前一周饮水量测量
• 2.4.4 动物颌下腺光镜观察
• 2.4.5 流式细胞仪检测颌下腺组织细胞凋亡
• 2.4.6 IFN-R、IL-10、FAS、FASL测定（免疫组化法）
• 2.4.7 统计学分析
• 结果
• 1 动物一般情况观察
• 2 动物体重的测量结果
• 3 小鼠颌下腺浸润程度光镜观察
• 4 颌下腺细胞凋亡的检测结果
• 5 IFN-R和IL-10的检测结果
• 6 FAS和FASL的检测结果
• 讨论
• 1 SS发病机理理论研究
• 2 SS发病机理实验研究
• 3 路氏滋燥汤对SS的作用机理
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 附图