基于脂质体技术的蛋白质类药物传递系统的研究

论文摘要

脂质体在生物体内可以降解、无毒和无免疫原性,作为药物载体,具有靶向性,从而减少药物剂量,降低毒性,减少副作用等优点。与传统的脂质体相比,复乳法制备的多泡脂质体（MVLs）,还具有不连续的药物溶液囊泡,这些囊泡被连续的非同心的类脂双分子磷脂膜所分隔,具有更多的包封容积和较大的粒径,当某个囊泡破裂时,药物只从破裂囊泡释出,完整的囊泡仍然可以保持原状,因而有很好的缓释效应。但它也同其它传统脂质体一样,稳定性差和易被清除;脂质体是被动地捕获药物,所以对于水溶性的蛋白质来说,低包封率也是一个很难解决的问题;MVLs纯化后将导致大量的未包封蛋白质药物流失,而且分离MVLs本身也是一个比较复杂的过程。以海藻酸钠（Alg）包覆MVLs和未被MVLs包封的游离蛋白,形成一种新型蛋白质类药物载体系统（MVLs-Alg）,因其良好的材料特性及制备过程温和的反应特性可能成为极具有潜力的蛋白质类药物的载体系统。作为极具潜力的蛋白质类药物载体系统,是否具备高包封率、均一的粒径、良好的释放性能以及蛋白质的结构和生物活性稳定等缺乏认识;MVLs和海藻钠之间是否存在相互作用,以及MVLs-Alg的理化性质和稳定性也尚未研究。针对上述问题,本论文结合脂质体和微囊化技术,建立一种新型蛋白质类药物载体系统,对MVLs-Alg的制备过程参数进行优化,并力图认识该载体系统的理化性质、稳定性和释放性能,进一步研究该载体系统对蛋白质的结构和生物活性的影响。首先,以牛血清蛋白（BSA）为模型药物,采用复乳法制备MVLs,然后进一步利用Alg,采取乳化/内部凝胶化法包封MVLs和游离的BSA,成功制备出高包封率,球型度好,尺寸小且分布均匀的MVLs-Alg,考察了过程参数（如药材比、磷脂比、Alg浓度、搅拌速度等因素）对包封率、粒径大小、产量和球型度等的影响,从而可以优化制备工艺条件。其次,考察了优化后制备的MVLs-Alg粒径大小、粒径分布和过氧化值,研究MVLs-Alg在不同保存条件下的稳定性和内部结构变化,该载体系统的表面形态圆整,光滑,隐约可见MVLs均匀分散于凝胶珠中,平均粒径为0.25 mm,提高了MVLs的包封率和稳定性,而且在4℃条件下存放相对比较稳定,经差示热分析,认为MVLs与Alg之间可能发生了物理吸附作用。再次,考察了该载体系统的体外释放行为,对释放情况进行拟合,并考察不同工艺条件、不同释放介质和不同制备方法对体外溶出度的影响,发现该载体在SBF等渗液中具有明显的缓释效果,与单一的MLVs或Alg微囊相比,体外释放

论文目录

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• 英文摘要
• 图表目录
• 缩写表
• 1 绪论
• 1.1 立题依据
• 1.1.1 蛋白质及多肽类药物的性质
• 1.1.2 脂质体的特性
• 1.1.3 多泡脂质体的特点
• 1.1.4 海藻酸钠的特性
• 1.1.5 MVLs 的不足
• 1.1.6 拟采取的措施
• 1.2 本课题简介
• 1.2.1 研究意义
• 1.2.2 主要内容
• 1.2.3 技术路线
• 1.3 本研究的创新之处
• 1.4 论文的基本框架
• 2 研究背景与文献综述
• 2.1 药物的控释系统
• 2.1.1 蛋白质类药物的的性质
• 2.1.2 蛋白和多肽的给药系统
• 2.2 脂质体
• 2.2.1 脂质体组成和特性
• 2.2.2 脂质体的分类及其制备方法
• 2.3 多泡脂质体
• 2.3.1 MVLs 的制备
• 2.3.2 影响包封率的因素
• 2.3.3 影响释放的因素
• 2.3.4 MVLs 的释放机制
• 2.4 脂质体的稳定性
• 2.4.1 脂质体的化学稳定性
• 2.4.2 脂质体的物理稳定性
• 2.4.3 脂质体的生物学稳定性
• 2.5 海藻酸钠
• 2.5.1 海藻酸钠的生物相容性
• 2.5.2 海藻酸钠药物传递系统中的应用
• 2.5.3 海藻酸凝胶珠制备
• 2.6 小结
• 3 MVLs-Alg 的制备及影响因素的考察
• 3.1 实验材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 实验结果
• 3.2.1 BSA 的标准曲线
• 3.2.2 不同方法制备的脂质体包封率的比较
• 3.2.3 各因素对MVLs 包封率的影响
• 3.2.4 MVLs-Alg 条件实验考察
• 3.3 讨论
• 3.3.1 MVLs 的制备条件考察
• 3.3.2 MVLs-Alg 的制备条件考察
• 3.4 小结
• 4 MVLs-Alg 的理化性质及初步稳定性研究
• 4.1 实验材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 实验结果
• 4.2.1 MVLs-Alg 形态及粒径分布
• 4.2.2 差示热分析
• 4.2.3 初步稳定性研究
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 5 MVLs-Alg 体外溶出度研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.2 实验结果
• 5.2.1 MVLs-Alg 的体外释放效果
• 5.2.2 MVLs-Alg 的缓释效果评价
• 5.2.3 Alg 浓度对MVLs-Alg 体外释放行为的影响
• 5.2.4 磷脂比对MVLs-Alg 的体外释放行为的影响
• 5.2.5 制备方法对MVLs-Alg 的体外释放行为的影响
• 5.2.6 MVLs、Alg 微囊、MVLs-Alg 的体外释放行为研究
• 5.2.7 MVLs-Alg 在不同介质中的释放行为研究
• 5.3 讨论
• 5.4 小结
• 6 MVLs-Alg 对蛋白结构及活性影响的研究
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 材料
• 6.1.2 方法
• 6.2 实验结果
• 6.2.1 蛋白质的完整性
• 6.2.2 蛋白质的二级结构
• 6.2.3 蛋白质的分子构象
• 6.2.4 蛋白质的生物活性
• 6.3 讨论
• 6.4 小结
• 7 结论及后续工作建议
• 7.1 主要研究内容和结果
• 7.2 不足和后续工作建议
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• A 攻读博士学位期间参与的研究项目
• B 攻读博士学位期间的科研成果
• 独创性声明
• 学位论文版权使用授权书