蓖麻毒素的分离提取及活性研究

论文摘要

本研究以蓖麻毒素灭鼠为目的，以小白鼠活性实验为筛选指标，研究了从蓖麻种子中分离蓖麻毒蛋白的方法，实现了对蓖麻毒素的最优提取，并利用得到的蓖麻籽粗提物对小白鼠进行灭鼠试验，来模拟高原鼠兔的灭鼠效果评价。最终在野外大面积应用实验中，取得了比较满意的效果。以蓖麻籽为原料，通过选用不同物质做浸提剂，单独研究了各种浸提剂对蓖麻毒素的最佳提取方法，在综合对各浸提剂在其最佳提取条件下的提取蓖麻毒素的效果后，最终确定，0.2mol／L的磷酸缓冲液在对去皮蓖麻籽的质量体积比为1：3（g／ml）时，浸提24小时后，所得混合物4000rpm离心30min，小心除去油脂，以及离心所剩的渣滓，保留清液，在清液中加入（NH4）2SO4盐析剂到80％饱和度，盐析24小时，10000rpm离心30min，再经透析，真空干燥后所得蓖麻毒素（粗毒）产率最高，同时该提取方法还兼顾到蛋白的稳定性及整个提取流程的经济性，正是要寻找的最佳工艺路线。应用提取出的蓖麻毒素（粗毒）对小白鼠做活性实验，结果表明，蓖麻毒素对小鼠腹腔注射的LD50为7.971ug／kg，其主要药效成分为蓖麻毒素。蓖麻毒素使小白鼠中毒后无明显异常反应，不容易造成拒食现象，能够提高灭鼠效率。而小白鼠从腹腔注射后30h开始出现死亡，直到96h后均有死亡，说明本毒饵是高效、慢性灭鼠剂。针对川西北高原的主要害鼠—高原鼠兔，应用蓖麻毒素灭鼠剂进行了野外防治实验，在大面积实验中，该粗毒以1％浓度配制毒饵对高原鼠兔的校正灭效为85％以上。小区实验的灭效在90％左右。通过连续半个月的观察，未发现鹰等天敌出现二次中毒现象，对受试绵羊也无明显影响，禁牧期后，未发现对牲畜造成危害。这些都充分说明，蓖麻毒素灭鼠剂在应用中是具有安全保障的。上述研究结果说明，蓖麻毒素灭鼠剂作为一种新型的灭鼠剂，无二次中毒，对牛、羊等对非靶标生物未见明显危害，比较安全、无残毒，不造成环境污染。不失为一种优良的安全无公害灭鼠剂。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 蓖麻毒素的提取与分离
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 主要仪器与药品
• 1.3 实验方法
• 1.3.1 第一部分实验 浸提剂的选择及浸提条件的摸索
• 1.3.1.1 不同浸提剂的选择
• 1.3.1.2 浸提剂的最佳抽提时间的选择
• 1.3.1.3 浸提剂的最佳抽提体积的选择
• 1.3.2 第二部分实验 盐析剂的选择及最佳盐析条件的摸索
• 1.3.3 第三部分实验 最佳浸提条件下各浸提剂的蓖麻粗毒产率
• 2. 结果与分析
• 2.1 不同浸提剂灭鼠效果
• 2.2 最佳浸提时间的选择
• 2.3 最佳浸提体积的选择
• 2.4 盐析剂及最佳盐析条件的选择
• 2.5 最优条件下各浸提剂的蓖麻粗毒产率
• 3. 讨论
• 第二章 蓖麻毒素灭鼠剂的药效研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 主要仪器与药品
• 1.3 实验方法
• 1.3.1 灭鼠剂有效成分的确定
• 50的测定'>1.3.2 蓖麻毒素LD₅₀的测定
• 1.3.3 野外实验
• 1.3.3.1 时间、地点以及气候条件
• 1.3.3.2 防治对象
• 1.3.3.3 小区实验
• 1.3.3.4 大面积实验
• 1.3.3.5 灭鼠剂安全性实验
• 2. 结果与分析
• 2.1 灭鼠剂有效成分的确定
• 50的测定'>2.2 蓖麻毒素LD₅₀的测定
• 2.3 野外实验灭鼠效果
• 2.3.1 小区实验
• 2.3.2 大面积实验
• 2.3.3 安全性实验
• 3. 讨论
• 总结
• 文献综述
• 参考文献
• 在读期间发表文章
• 致谢