论文摘要
目的构建金黄色葡萄球菌肠毒素B（Staphylococcal Enterotoxin B,SEB）编码基因的原核表达克隆,并在大肠杆菌中表达,同时对表达蛋白的生物学活性进行研究。方法提取产肠毒素B的金黄色葡萄球菌临床分离菌株的DNA,DNAstar软件辅助设计引物,PCR扩增出肠毒素B（SEB）成熟肽前体蛋白基因,将其插入到质粒pGEX-4T-2编码谷胱肽转移酶（GST）读码框架下游的多克隆位点（MCS）,构建原核表达克隆PGEX-4T-2/SEB。重组质粒经双酶切、测序鉴定后,以TSS法转入大肠杆菌DH5α,用终浓度为1mmol/L的IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE电泳分析表达蛋白图谱,Western blot鉴定表达蛋白。结果经酶切和测序分析表明,克隆获得了金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）的编码基因,且插入片段读码框架正确,无碱基错配,pGEX-4T-2/SEB原核表达克隆构建成功。经IPTG诱导,重组质粒转化的大肠杆菌表达出相对分子质量（Mr）为58×10（3） Daltons的融合蛋白。Western blotting证实该蛋白能与抗SEB抗体发生特异性结合反应,具有抗原活性。结论金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）编码基因原核表达克隆的构建成功,并能在大肠杆菌中高效表达,为进一步研究肠毒素B（SEB）的生物学功能和临床应用奠定了基础。