桦癌褐孔菌多糖诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡研究

论文摘要

本文研究了桦癌褐孔菌多糖（FOPS）作用于体外培养的人肝癌HepG-2细胞株,观察其抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用。采用噻唑蓝比色法（MTT法）测定了FOPS对人肝癌HepG-2肿瘤细胞的生长抑制作用;通过倒置显微镜和透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;应用琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA片段;流式细胞仪检测细胞周期的改变及细胞凋亡率;RT-PCR法检测药物处理前后凋亡相关基因Bcl-2及BaxmRNA表达的变化。发现FOPS在体外对人肝癌HepG-2细胞的生长有明显的抑制作用。MTT检测结果发现FOPS对人肝癌HepG-2细胞株的增殖抑制作用呈剂量、时间依赖关系。通过倒置显微镜观察发现实验组细胞生长稀疏,胞浆透亮度下降,细胞脱落增多;透射电镜下观察,实验组细胞核染色质固缩、边集,核质内可见空泡,出现凋亡小体等。通过琼脂糖凝胶电泳观察到呈梯度的DNA片断。流式细胞仪检测结果,实验组均可见亚二倍体峰,且凋亡率随用药浓度的增加而增大,s期细胞所占百分比也随用药浓度的增加而上升,表明肿瘤细胞在S期聚集,阻止了向G2/M期的转换,从而影响了细胞周期。凋亡基因检测结果,用药组细胞中Bax mRNA的表达明显增强,而Bcl-2 mRNA的表达却无明显变化。结果表明:FOPS在体外可抑制HepG-2细胞的增殖,并可诱导HepG-2细胞发生凋亡,出现凋亡所特有的形态学及生化变化。FOPS诱导HepG-2细胞凋亡的机制可能与增强Bax的表达有关。提示FOPS的抗肿瘤作用可能与诱导细胞凋亡有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 桦癌褐孔菌多糖的药理作用
• 1.1.1 桦癌褐孔菌多糖的抗氧化作用
• 1.1.2 桦癌褐孔菌多糖的免疫调节作用
• 1.1.3 桦癌褐孔菌多糖的降血糖、降血脂作用
• 1.1.4 桦癌褐孔菌多糖的抗肿瘤作用
• 1.2 多糖诱导肿瘤细胞凋亡机制
• 1.2.1 调控癌基因
• 1.2.2 线粒体途径
• 1.2.3 死亡受体途径
• 1.2.4 端粒酶
• 1.2.5 DNA拓扑酶
• 1.2.6 改变钙离子浓度
• 1.2.7 改变膜流动性
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 细胞系
• 2.1.4 菌种
• 2.1.5 主要溶液的配置
• 2.2 方法
• 2.2.1 桦癌褐孔菌多糖的提取及纯化
• 2.2.2 细胞的复苏、培养、冻存
• 2.2.3 MTT实验
• 2.2.4 观察HepG-2细胞的形态学变化
• 2.2.5 HepG-2细胞总DNA提取及琼脂糖凝胶电泳
• 2.2.6 流式细胞仪检测HepG-2细胞凋亡率及细胞周期
• 2.2.7 RT-PCR检测Bcl-2和Bax mRNA的表达
• 2.2.8 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 桦癌褐孔菌多糖的提取
• 3.2 MTT实验
• 3.3 细胞形态学变化
• 3.3.1 倒置显微镜观察
• 3.3.2 透射电子显微镜观察
• 3.4 桦癌褐孔菌多糖对HepG-2细胞DNA的影响
• 3.5 流式细胞术检测HepG-2细胞周期分布及凋亡率
• 3.6 Bcl-2、Bax基因mRNA的表达水平
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢