艾叶化学成分的提取、分离与含量测定研究

论文摘要

目的：通过对艾叶中总黄酮成分进行提取,并建立含量测定方法；以及对艾艾叶中的黄酮单体化合物及其他化学成分进行提取、分离、结构鉴定,为进一步系统研究艾叶的化学成分及药理毒理作用提供依据,为艾叶有效化学成分的大量提取制备和深入开发奠定基础。方法：本研究是在查阅大量相关文献的基础上,通过对文献报道的艾叶化学成分的结构特点和化学性质进行综合分析后拟定实验方法。首先以乙醇浸渍法提取艾叶中的总黄酮成分,浓缩成浸膏。将浸膏进行处理获得预试品,并制成溶液,用亚硝酸钠和硝酸铝显色,于紫外分光光度计下测定吸光度值,进而计算出艾叶样品中总黄酮含量。对显色剂的加入时间、溶液pH值等影响因素进行分析,选择最佳试验方法并绘制标准曲线,并对此方法进行方法学考察,从而建立艾叶中总黄酮含量测定方法。然后再以不同极性的溶剂（石油醚、乙酸乙酯、正丁醇）对总黄酮浸膏进行萃取分离。其中对艾叶的乙酸乙酯层萃取物分别采用硅胶柱层析,凝胶柱层析Sephadex LH-20,凝胶渗透柱色谱Toyopeal HW-40,制备薄层色谱以及制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,得到单体化合物。运用1H-NMR,13C-NMR和二维核磁共振等现代波谱技术对单体化合物的结构进行综合解析和鉴定。结果：通过影响因素和相关方法学考察,确定了艾叶中总黄酮含量测定方法,建立标准曲线为：A=0.0118C+0.0133, r=0.9991,在5.800～58.000μg/ml范围线性关系良好。该含量测定方法准确度、精密度、重现性良好,且在30min内具有良好的稳定性。同时,从艾叶的乙酸乙酯提取部位中共分离得到4个单体化合物,通过鉴定,其结构分别为5,7,3’-三羟基-3,6,4’-三甲氧基黄酮醇（1）,5,7-二羟基-3,3’,6,4’一四甲氧基黄酮醇（2）,东莨菪内酯（3）,对羟基苯甲醛（4）。其中化合物（1）和（2）为黄酮醇类化合物,化合物（3）为香豆素类,化合物（4）为芳香类小分子化合物。经过文献检索,化合物（1）和（2）为首次从艾叶中分离得到。结论：本研究利用亚硝酸钠和硝酸铝显色原理,紫外分光光度法测定而建立了艾叶中总黄酮的含量测定方法,该方法简便快速、准确稳定、重现性好。在此基础上采用多种天然药物化学提取分离方法,继续对艾叶中总黄酮及其他化学成分进行分离纯化,并利用现代波谱技术对所分离化合物进行结构鉴定,最终确定4种单体化合物。对比文献,本研究使用的方法更具有可操作性,与传统的醇-水系统提取方法相比,更为准确有效。本研究中所提取分离的化合物（1）和（2）为黄酮醇类化合物,且为首次从该植物中分离得到,在一定程度上弥补了艾叶现代研究中对黄酮类化合物认识的不足,也为其药理活性筛选和毒性研究提供了必要的前提条件。随着研究的深入,对艾叶的化学成分和药理活性的认识将更为明确,为发现有生物活性的先导化合物,阐明药效关系,提供了基础数据,也必将推动中药艾叶的现代化研究以及深入开发利用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、艾叶总黄酮的提取及含量测定
• 1.1 对象和方法
• 1.1.1 实验仪器
• 1.1.2 实验材料
• 1.1.3 艾叶浸膏的制备
• 1.1.4 艾叶中总黄酮含量测定方法的建立及影响因素考察
• 1.1.5 艾叶中总黄酮含量测定的方法学研究
• 1.2 结果
• 1.2.1 不同浓度乙醇制备艾叶浸膏结果
• 1.2.2 艾叶中总黄酮含量测定方法及影响因素考察结果
• 1.2.3 艾叶中总黄酮含量测定的方法学研究结果
• 1.3 讨论
• 1.3.1 黄酮类化合物的提取方法
• 1.3.2 硝酸铝络合分光光度法测定总黄酮的原理
• 1.4 小结
• 二、艾叶化学成分的提取分离
• 2.1 对象和方法
• 2.1.1 实验仪器
• 2.1.2 实验材料
• 2.1.3 提取和不同极性部位的萃取
• 2.1.4 乙酸乙酯提取物的分离纯化
• 2.2 结果
• 2.2.1 提取和不同极性部位萃取结果
• 2.2.2 乙酸乙酯提取物的分离纯化结果
• 2.3 讨论
• 2.3.1 本实验所应用各种柱层析分离时的注意事项
• 2.3.2 薄层色谱展开剂的选择
• 2.4 小结
• 三、艾叶化学成分的结构解析与鉴定
• 3.1 化合物1的结构解析
• 3.2 化合物2的结构解析
• 3.3 化合物3的结构解析
• 3.4 化合物4的结构解析
• 3.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢