荧光定量PCR检测饲料中牛羊源性成分方法的建立

论文摘要

疯牛病对全球的畜牧养殖业以及人类健康产生了巨大的危害,流行病学调查证明疯牛病、羊痒病都是由朊蛋白（prion）引起,并通过食物链传染而传播,并与人新型克-雅氏症的发病有关。研究证明,用患有疯牛病和羊痒病的牛、羊等动物的肉和骨头制成的肉骨粉喂养动物会导致疯牛病和羊搔痒病的传播,因此包括我国在内的世界各国严令禁止使用反刍动物蛋白饲料饲喂牛、羊等动物,由此也产生了对饲料中是否含牛、羊源性成分进行检测的必要。目前国内外对于饲料中反刍动物源性成分的检测方法的报道主要有显微镜检、红外光谱、普通PCR、ELISA等,但这些方法存在检测量小、易产生假阳性结果、要求检验人员有丰富的操作经验等缺点,需要建立一种更快速、准确和经济的方法,而荧光定量PCR法正是一种可以满足这些要求的方法。本论文从以下三个方面对这一方法进行了研究:1饲料中牛、羊成分DNA的提取及净化条件2、实时荧光定量PCR的反应条件3方法的特异性、灵敏度及稳定性,通过解决了样品DNA提取的时间、温度、试剂、特异性引物及探针序列、PCR反应变性、退火、延伸温度和时间及循环次数等关键性问题而成功建立了实时荧光定量PCR法检测饲料中牛、羊源性成分的方法。实时荧光定量PCR法不仅很好的解决了普通PCR容易污染的问题,还具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、检测成本低等优点,为饲料安全监督提供了准确、有力的实验证据和方法。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 研究的背景及意义
• 1.2 检测方法研究进展
• 1.3 荧光定量 PCR 简介
• 第二章 方法的建立
• 2.1 材料、试剂及设备
• 2.2 引物及探针序列的设计、改进
• 2.3 饲料中动物源性成分DNA 的抽提
• 2.4 实时荧光PCR 反应条件的摸索、建立
• 2.5 方法稳定性、特异性、灵敏性及抗干扰性试验
• 第三章 方法的应用
• 3.1 盲样检测
• 3.2 实际检测
• 3.3 推广应用
• 参考文献
• 致谢
• 发表论文