注射用姜黄素长循环脂质体的研究

论文摘要

姜黄素具有广泛的生物学活性,是一个具有很大应用前景的药物。其生物学活性主要包括防癌抗癌作用,抗炎作用,抗氧化作用,清除自由基,抗人类免疫缺陷病毒作用,对肝脏。肾脏的保护作用及抗纤维化作用。但姜黄素难溶于水,在体外也容易被氧化,体内被快速代谢,体内半衰期短,难以静脉给药,故目前没有稳定性较好的药物剂型,口服的姜黄素大部分也在胃肠道内被代谢失活,被吸收到血循环中的量很少,因此给姜黄素的临床应用,尤其在肿瘤治疗中的应用带来了极大的困难。将长循环脂质体技术应用于姜黄素制剂,延长其在体内的滞留时间,提高药效及生物利用度是本文的核心任务。本文建立了两种姜黄素体外分析方法:紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法,紫外-可见分光光度法主要用于脂质体包封率测定时药物含量的测定,该法操作简单,快捷;高效液相色谱法主要应用于姜黄素理化性质的考察和体内外释药行为研究时药物含量的测定,该法灵敏度高,重现性好。选用微柱离心法作为姜黄素脂质体包封率的测定方法,该法是一种快速、简便的分离脂质体内外相中小分子药物的方法其优点是脂质体混悬液几乎没有被稀释,可避免脂质体的渗漏。本文从三个方面考察了姜黄素的理化性质:姜黄素在不同pH的磷酸缓冲液中稳定性的考察,提示姜黄素在酸性环境中稳定,在中性和碱性条件下可转变为两种极性较姜黄素大的物质;姜黄素在不同缓冲液中饱和溶解度的测定和姜黄素表观油水分配系数的测定,提示姜黄素是一种脂溶性很好的抗癌药物,制成脂质体,理论上应有很高的包封率。以包封率为指标,对姜黄素脂质体进行单因素考察、正交试验设计,得到姜黄素脂质体的最优处方:磷脂用量为50mg,磷脂与胆固醇的质量比为3∶1,药脂比为1∶13,选用pH为5.0的PBS/20 mmol·L-1;并在此基础上对姜黄素长循环脂质体进行了正交试验设计,得到姜黄素长循环脂质体的最优处方:磷脂用量为50mg,磷脂与胆固醇的质量比为5∶1,药脂比为1∶13,选用分子量为2000的PEG-Chol用量为磷脂的5%（mol/m01）,选用pH为5.0的PBS/20 mmol·L-1。并考察了两者的理化性质和体外释药行为。分别进行了姜黄素注射液、普通脂质体（Cur-L）和长循环脂质体（Cur-PEG-L）的大鼠体内药代动力学和小鼠体内组织分布。药代动力学研究结果表明:经大鼠尾静脉注射后,Cur-L和Cur-PEG-L在多数取样时间点的血药浓度较姜黄素注射液有所提高,Cur-PEG-L明显延长了药物在血浆中的滞留时间,提高了生物利用度,MRT和AUC分别为注射液的10.6倍和9.311倍。小鼠体内组织分布实验结果标明:经小鼠尾静脉注射后Cur-L和Cur-PEG-L较姜黄素注射液在各组织中的消除半衰期明显延长,Cur-L蓄集于网状内皮系统（RES）,在肝脾中的相对分布百分率（re）明显高于Cur-PEG-L,Cur-PEG-L明显降低了RES的吞噬作用,在肺部表现出明显的靶向性,有望作为姜黄素肺癌治疗的理想载体。

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中文摘要

ABSTRACT

前言

1. 姜黄素的来源，性质和分子结构

2. 姜黄素的生物学活性

2.1 防癌抗癌作用

2.1.1 抗肝癌的应用

2.1.2 抗结肠癌的应用

2.1.3 抗乳腺癌的应用

2.2 抗炎活性

2.3 抗氧化作用

2.4 清除氧自由基

2.5 抗人类免疫缺陷病毒作用

2.6 对肝脏、肾脏的保护作用

2.7 抗纤维化作用

2.8 毒副作用与安全性

3. 姜黄素的抗肿瘤作用机制及临床应用

3.1 姜黄素的抗肿瘤作用机制

3.1.1 抗始发阶段

3.1.2 抗促癌及演变机制

3.1.3 抗癌的侵袭和转移

3.1.4 增加化疗药物对细胞的敏感性

3.2 姜黄素的临床应用

4. 长循环脂质体的研究进展

4.1 长循环脂质体概述

4.2 脂质体内外膜的双面修饰

4.3 脂质体外膜表面的修饰

5. 论文设计与研究方案

第一章姜黄素及其制剂分析方法的建立

1. 仪器和材料

1.1 药品与试剂

1.2 仪器

2. 方法与结果

2.1 姜黄素紫外分光光度法分析方法的建立

2.1.1 UV扫描波长的确定

2.1.2 标准曲线的绘制

2.1.3 精密度试验

2.1.4 回收率试验

2.2 高效液相色谱法（HPLC）分析方法的建立

2.2.1 检测波长的选择

2.2.2 色谱条件的确定

2.2.3 HPLC的方法学考察

2.2.3.1 检测限和定量限

2.2.3.2 标准曲线的绘制

2.2.3.3 精密度试验

2.2.3.4 回收率试验

2.3 姜黄素脂质体包封率测定方法的确定

2.3.1 透析袋法测定包封率

2.3.2 超速离心法测定包封率

2.3.3 微柱离心法测定包封率

2.3.3.1 微型柱的制备

2.3.3.2 洗脱曲线的考察

2.3.3.3 包封率的测定

2.3.3.4 方法学考察

3. 讨论与小结

3.1 讨论

3.2 小结

第二章姜黄素制剂处方前研究

1. 仪器和材料

1.1 药品与试剂

1.2 仪器

2. 方法与结果

2.1 姜黄素在不同pH的磷酸盐缓冲液中稳定性的考察

2.1.1 测定方法

2.1.2 实验结果

2.2 姜黄素在不同pH的磷酸盐缓冲液中饱和溶解度的测定

2.2.1 饱和溶解度的测定方法

2.2.2 实验结果

2.3 姜黄素油水分配系数的测定

2.3.1 表观油水分配系数的测定方法

2.3.2 实验结果

3. 讨论与小结

3.1 讨论

3.2 小结

第三章姜黄素普通脂质体的制备及其理化性质的研究

1. 仪器和材料

1.1 药品与试剂

1.2 仪器

2. 方法与结果

2.1 脂质体制备方法的筛选

2.2 姜黄素脂质体处方的筛选

2.2.1 缓冲液种类对包封率的影响

2.2.2 磷脂与胆固醇的比例对包封率的影响

2.2.3 不同pH值对包封率的影响

2.2.4 不同药脂比对包封率的影响

2.2.5 不同离子强度对包封率的影响

2.3 正交实验筛选和优化处方

2.4 姜黄素普通脂质体的理化性质考察

2.4.1 姜黄素普通脂质体的粒径分布

2.4.2 姜黄素普通脂质体的zeta电位

2.4.3 姜黄素普通脂质体的体外释放

2.4.4 姜黄素脂质体初步稳定性研究定

3. 讨论与小结

3.1 讨论

3.2 小结

第四章姜黄素长循环脂质体的制备及其理化性质的研究

1. 仪器和材料

1.1 药品与试剂

1.2 仪器

2. 方法与结果

2.1 姜黄素长循环脂质体的处方优化

2.1.1 不同分子量的PEG对包封率的影响

2.1.2 PEG2000-Chol用量对包封率的影响

2.2 正交试验筛选和优化处方

2.3 姜黄素长循环脂质体的理化性质考察

2.3.1 姜黄素普通脂质体的粒径分布

2.3.2 姜黄素普通脂质体的zeta电位

2.3.3 姜黄素普通脂质体的体外释放

2.4 姜黄素脂质体初步稳定性研究定

3. 讨论与小结

3.1 讨论

3.2 小结

第五章姜黄素长循环脂质体大鼠体内药代动力学研究

1. 仪器和材料

1.1 药品与试剂

1.2 仪器

1.3 实验动物

2. 方法与结果

2.1 血浆中姜黄素含量测定的方法

2.1.1 色谱条件

2.1.2 血浆中药物提取与处理

2.1.3 色谱条件专属性实验

2.1.4 标注曲线的绘制

2.1.5 方法精密度试验

2.1.6 加样回收率实验

2.1.7 方法灵敏度实验

2.2 大鼠药代动力学实验

2.3 生物利用度的计算

3. 讨论与小结

3.1 讨论

3.2 小结

第六章姜黄素长循环脂质体小鼠体内组织分布研究

1. 仪器和材料

1.1 药品与试剂

1.2 仪器

1.3 实验动物

2. 方法与结果

2.1 各组织中姜黄素含量测定的方法

2.1.1 色谱条件

2.1.2 组织中药物提取与处理

2.1.3 标注曲线的绘制

2.1.4 方法精密度试验

2.1.5 加样回收率实验

2.1.6 方法灵敏度实验

2.2 小鼠体内组织分布实验

3. 讨论与小结

3.1 讨论

3.2 小结

全文结论

参考文献

致谢

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