法舒地尔对兔股静脉移植物内膜增厚作用的实验研究

论文摘要

目的:血管损伤是创伤骨科常见问题,约1/3动脉损伤病例需要血管替代物进行修复。自体静脉移植是治疗中小动脉缺损的首选方法。静脉移植物受到诸如缺血、机械损伤和血流动力学变化等多种因素影响,出现一系列适应性变化。这些变化包括静脉内皮细胞脱落,炎性细胞沉积,中膜平滑肌细胞增殖并迁移至内膜,细胞外基质在内膜沉积,进而引起内膜增厚,最终导致血管腔发生狭窄甚至阻塞。据统计,静脉移植术后5年供体血管狭窄发生率达30%50%。目前研究热点主要集中在静脉移植物再狭窄的成因与防治上。法舒地尔是一种Rho激酶抑制剂,具有降低内皮细胞通透性,抑制内皮细胞脱落,减缓平滑肌细胞增殖、迁移,减少炎性因子分泌的作用。本研究采用家兔作为实验对象,建立自体股静脉-股动脉移植模型,静点法舒地尔干预。取材后对移植静脉进行组织形态学观察,测定内膜厚度;透射电镜观察细胞与基质的超微结构变化;增殖性细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色观察细胞增殖情况;脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷（dUTP）缺口末端标记法（TUNEL）法测调亡细胞所占比例。通过以上研究来探讨Rho激酶与移植静脉内膜增厚和管腔狭窄的关系及法舒地尔对移植静脉狭窄的防治作用及机制。方法:选取体重2.3-2.5kg新西兰白兔24只,随机分为A组（对照组）和B组（法舒地尔处理组）,每组12只。每只动物行两侧股动脉缺损自体静脉移植术。B组动物每日给予盐酸法舒地尔30mg/kg静点自术前3天直至取材,A组给予0.9%氯化钠注射液静点做空白对照。术后3天各组动物每日肌注肝素钠500u/kg抗凝、青霉素80万u预防感染。术后2、4周取材,每次每组处死6只动物。苏木素-伊红（HE）染色行组织形态学观察,并测定内膜厚度,电镜观察超微结构,免疫组织化学方法检测PCNA阳性细胞比例,TUNEL法检测原位调亡细胞比例,使用计算机图像分析系统进行图像分析。SPSS11.0统计软件处理实验数据,两组比较采用t/t’检验。结果1大体观察动物术中及术后无死亡、伤口感染及移植静脉破裂大出血,移植静脉的术后即刻及取材时通畅率均为100%。2组织形态HE染色显示正常静脉内膜主要为单层扁平上皮。术后AB组内膜均可见增厚,术后2周,A组家兔内膜（μm） （44.83±3.53）较B组（30.33±3.23）明显增厚（P<0.05）;术后4周,A组家兔内膜厚度（μm） （66.16±8.45）较B组（43.11±4.92）增加（P<0.05）。电镜观察A组移植术后2周即可见平滑肌细胞体积增大,分泌型平滑肌细胞增加;术后4周内膜中可见大量平滑肌细胞,中膜平滑肌细胞间质及胶原纤维明显增多。B组术后2周平滑肌细胞未见明显增大;术后4周平滑肌细胞略有增大,分泌型平滑肌细胞有所增加。3静脉PCNA免疫组化染色术后2周,A组内膜PCNA阳性细胞百分比分别为（20.08±3.56）%,较B组百分数（14.28±2.76）%明显增加;术后4周两组内膜PCNA的阳性细胞数均减少,A组内膜PCNA阳性细胞百分比（8.73±1.35）%,较B组（7.61±1.06）%增多（P<0.05）。4 TUNEL测定细胞原位凋亡B组移植静脉2周和4周时内膜中阳性细胞所占比例（3.55±0.36）%和（1.22±0.18%）比A组（1.11±0.31）%和（0.55±0.11）%明显增多,二者差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:法舒地尔抑制细胞增殖、迁移的作用使移植静脉内膜增厚速度和程度下降,减轻血管狭窄,有利于维持移植静脉血管的通畅和远端肢体的供血。此研究结果为临床预防移植静脉再狭窄提供了一种可行的方法。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 Rho激酶及其抑制剂与血管疾病关系的研究进展
• 致谢
• 个人简历