人Bid蛋白质多肽的原核表达及多克隆抗体的制备和鉴定

论文摘要

Bid蛋白是Bcl-2家族中的一员,属于仅含BH3结构域的蛋白亚型。Bid在细胞凋亡进程中发挥重要的作用,它经表达切割后的活性片断具有促进凋亡的作用,它是将已知的凋亡两种途径联系起来的重要蛋白质,在研究细胞凋亡信号转导通路过程中,需要对Bid进行鉴定,目前只有国外厂家有用于鉴定人Bid蛋白的抗体产品,价格昂贵。本研究拟制备用于Western Blot鉴定用的抗人Bid多克隆抗体满足后续细胞凋亡信号转导实验的研究。本实验通过PCR法合成Bid蛋白重复多肽的编码基因,将其克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,用IPTG诱导的、在大肠杆菌BL21菌株中高效表达了人Bid多肽,经GST亲和层析柱纯化该多肽后用于免疫家兔制备多克隆抗体,对制备的抗体进行Western Blot鉴定。实验结果证明我们成功制备了用于检测和鉴定人Bid的多克隆抗体,其纯度和效价达到要求,能够用于细胞凋亡过程中Bid的检测和鉴定。

论文目录

• 内容提要
• 第一章 前言
• 1.1 Bid 蛋白在细胞调亡中的作用
• 1.2 GST 基因融合系统[22]
• 1.3 多克隆抗体技术[25]
• 1.4 本实验研究的立题依据和实验流程
• 第二章 实验材料和方法
• 2.1 原料、仪器和试剂
• 2.2 实验方法[26]
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 PCR 法人工合成BID 抗原多肽编码基因
• 3.2 PGEX-6P-1-BID 重组质粒的构建和序列测定
• 3.3 IPTG 诱导GST-BID 融合多肽表达与纯化
• 3.4 GST-BID 融合蛋白免疫家兔制备抗BID 的多克隆抗体
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 致谢
• 作者简历