论文摘要
泡沫细胞形成是动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）发生的核心环节,胆固醇酯在细胞内蓄积是泡沫细胞形成的主要生物化学改变。在胆固醇酯聚积、泡沫细胞形成的过程中,脂酰CoA-胆固醇酰基转移酶1（acyl coenzyme A:cholesterol acyltransferase 1, ACAT1）催化细胞内胆固醇酯化,使巨噬细胞内胆固醇酯聚积过多,促进泡沫细胞的形成。苦瓜蛋白（Momordicin,MD）是从苦瓜果肉中分离出的一种分子量为28kDa的水溶性蛋白质,具有降脂、降血糖、抗炎、抗氧化等作用。关于苦瓜蛋白是否有抗动脉粥样硬化的作用,目前的报道还很少。本课题组长期以来研究苦瓜蛋白,已经发现苦瓜蛋白具有一定的抗动脉粥样硬化病变的作用。本实验进一步研究苦瓜蛋白对THP-1源性泡沫细胞的影响,研究苦瓜蛋白对细胞内ACAT1表达的影响,初步探讨苦瓜蛋白对泡沫细胞的作用机制。目的:进一步研究苦瓜蛋白对THP-1源性泡沫细胞的影响,并初步探讨其可能的机制,探讨其是否与影响ACAT1的表达有关。方法: THP-1细胞,于六孔板中,与佛波脂共育24h后,分别加入ox-LDL、ox-LDL和不同浓度的苦瓜蛋白,共育48h。THP-1与ox-LDL共育不同时间,成为泡沫细胞以后,再加入苦瓜蛋白分别作用12h和24h。油红O染色检测泡沫细胞内脂质,高效液相色谱检测细胞内胆固醇和胆固醇酯。Western blot检测THP-1源性泡沫细胞中脂酰CoA-胆固醇酰基转移酶1（ACAT1）蛋白的表达。结果:THP-1细胞与ox-LDL以及不同浓度的苦瓜蛋白共育48h以后,油红O染色观察可见,随着苦瓜蛋白浓度增加,细胞内脂滴减少,减小明显。高效液相色谱分析发现,苦瓜蛋白处理组和泡沫细胞模型对照组内的总胆固醇（TC）、胆固醇酯（CE）、CE/TC均明显高于正常细胞组,但苦瓜蛋白处理组的TC、CE、CE/TC值亦明显小于泡沫细胞模型对照组,差异具有显著性。Ox-LDL预先对THP-1作用一段时间之后,再加入苦瓜蛋白分别作用不同时间,油红O染色观察见,苦瓜蛋白处理组细胞内的脂滴明显少于、小于泡沫细胞模型对照组,其中,苦瓜蛋白作用24h比作用12h的效果更加明显。取视野中单个细胞观察,见苦瓜蛋白作用组的细胞内的脂滴明显减少。Western blot结果表明苦瓜蛋白处理组比泡沫细胞模型对照组的ACAT1蛋白表达下调。结论:苦瓜蛋白能抑制THP-1源性泡沫细胞的形成,并减少THP-1源性泡沫细胞内脂质含量,苦瓜蛋白下调泡沫细胞内ACAT1的表达。
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