论文摘要
目的：人CD137L是存在于细胞膜表面的Ⅱ型跨膜蛋白,通过传导共刺激信号来发挥作用,在动物实验中表明可以增强T细胞所介导的抗肿瘤生物活性。本实验检测CD137L在急性髓细胞白血病细胞系及临床患者中的突变表达,为临床急性髓细胞白血病的诊断和治疗提供依据。并构建和表达人CD137L胞外区蛋白,为治疗CD137L突变疾病奠定基础。方法：设计引物建立sCDl37L突变检测方法,采用RT-PCR检测THP-1细胞CD137L的表达；收集临床AML病例,经Ficoll分离后得到单个核细胞,定性检测临床患者sCD137基因突变。用基因克隆将人CD137L胞外区基因,组装到PET30（a）表达载体中；亲和层析进行纯化,SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达情况。ELISA和免疫组化初步检测CD137L的结合活性。结果：在THP-1细胞检测到两种sCD137L的突变类型,命名为ml和m2。ml型突变在AML患者发生率较低；m2型突变发生率依下列次序递减：M2>M1=M6>M4>M5>M3；m2型突变与AML疾病进展密切相关（P<0.05-0.01）。构建、表达并获得了纯度较高、产量较大的CD137L可溶性蛋白,产量大12mg/L培养基。该蛋白能与CD137阳性的细胞结合。结论：sCD137L变化与AML疾病发展和发生类型相关,开展临床检测sCD137L有助于监控AML的治疗和预后判断。获得的人CD137L胞外区蛋白,在抗肿瘤的免疫治疗中具有潜在应用前景。
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